[發(fā)明專利]一株丁香假單胞菌及其在防治蘋果輪紋病中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010098949.5
• 申請日: 2020-02-18
• 公開（公告）號: CN111286477B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王彩霞;李保華;練森;趙圓秀;晏朦;張清明
• 申請（專利權(quán)）人: 青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/27;A01P3/00;C12R1/38
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

1.一株丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae) 菌株B-1，所述菌株B-1保藏于：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號：CCTCC NO: M2015813。

2.一種權(quán)利要求1所述的丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae) 菌株B-1制備的生防菌劑，其特征是：所述生防菌劑是菌株B-1發(fā)酵上清液或菌株B-1菌懸液。

3.一種權(quán)利要求2所述的生防菌劑的應(yīng)用，其特征是：所述生防菌劑用于果蔬病害防治。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的生防菌劑的應(yīng)用，其特征是：所述生防菌劑用于蘋果輪紋病的防治。

5.一種權(quán)利要求2所述的生防菌劑的制備方法，其特征是：包括以下步驟：

（1）將菌株B-1劃線接種在NA培養(yǎng)基中，于30℃恒溫活化培養(yǎng)24 h，得到活化的菌株B-1單菌落A；

（2）將所述活化的菌株B-1單菌落A，接種于裝瓶量80mL/250mL的NB培養(yǎng)基中，180 r·min^-1，30℃恒溫震蕩培養(yǎng)12 h，得到菌株B-1發(fā)酵種子液B；

（3）將所述發(fā)酵種子液B按1:100的接種量接種到NB培養(yǎng)基中擴大培養(yǎng)，30℃恒溫震蕩培養(yǎng)24 h，得到10⁹cfu·mL^-1 B-1菌株的細(xì)胞培養(yǎng)液C；

（4）將10⁹cfu·mL^-1 B-1菌株的細(xì)胞培養(yǎng)液C，在4℃條件下，12000 r·min^-1離心15min，收集的上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，得到菌株B-1發(fā)酵上清液，即為生防菌劑；菌體沉淀用無菌水重新懸浮，得到10⁹cfu·mL^-1的菌懸液，即為生防菌劑。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生防菌劑的制備方法，其特征是：所述NA培養(yǎng)基由以下方法制備：取蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，瓊脂粉20 g，加水定容至1000 mL，調(diào)節(jié)pH值為7.0，121℃高壓蒸汽滅菌20 min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的生防菌劑的制備方法，其特征是：所述NB培養(yǎng)基由以下方法制備：取蛋白胨10 g，牛肉膏3 g，NaCl 5 g，加水定容至1000 mL，調(diào)節(jié)pH值為7.0，分裝于250mL三角瓶中，裝瓶量為80 mL，121℃高壓蒸汽滅菌20 min。

8.一種用于防治蘋果輪紋病的農(nóng)藥復(fù)配劑，其特征是：所述農(nóng)藥復(fù)配劑中的有效成分為2,6-二叔丁基對甲酚（BHT）和如權(quán)利要求1所述的丁香假單胞菌B-1菌懸液。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的農(nóng)藥復(fù)配劑，其特征是：所述農(nóng)藥復(fù)配劑由以下體積份數(shù)的有效成分制成：0.1 mmol·L^-1的2,6-二叔丁基對甲酚溶液1份和10⁵ cfu·mL^-1的丁香假單胞菌B-1菌懸液1份。

10.一種權(quán)利要求8或9所述的農(nóng)藥復(fù)配劑的應(yīng)用，其特征是：所述農(nóng)藥復(fù)配劑用于蘋果輪紋病防治。