[發明專利]一株丁香假單胞菌及其在防治蘋果輪紋病中的應用

有效

• 申請號: 202010098949.5
• 申請日: 2020-02-18
• 公開（公告）號: CN111286477B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 王彩霞;李保華;練森;趙圓秀;晏朦;張清明
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/27;A01P3/00;C12R1/38
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

本發明公開了一株丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)菌株B?1，所述菌株B?1保藏于：中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC NO:M2015813。本發明丁香假單胞菌B?1對蘋果輪紋病有顯著的防治效果，實施例的研究表明，菌株B?1可顯著抑制輪紋病菌菌絲的生長，且其抑菌譜較廣，除蘋果輪紋病菌外，還對果蔬采后灰霉病菌、果蔬采后青霉病菌、蘋果樹腐爛病菌、梨樹腐爛病菌、蘋果炭疽葉枯病菌、蘋果霉心病菌、桃褐腐病菌等多種果蔬病原真菌具有顯著的拮抗作用；本發明菌株B?1的菌懸液和發酵上清液對蘋果枝干和果實輪紋病的防治效果均在70％以上，具有防治效果穩定，對環境友好等特點，大規模生產的發酵工藝簡單、生產成本低廉。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，特別涉及一株丁香假單胞菌及其應用。

背景技術

蘋果輪紋病是蘋果枝干和果實重要病害之一，由葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)引起。蘋果輪紋病菌全年均可侵染蘋果樹枝干，形成輪紋病瘤、干腐病斑或馬鞍狀病斑，嚴重消弱樹勢，造成死枝甚至死樹；該病菌侵染果實，造成輪紋爛果。由于葡萄座腔菌自5月份即可侵入蘋果幼果，近成熟期大量發生，甚至在蘋果儲藏和運輸過程中也可造成大量爛果。

目前，全國范圍內調查發現，蘋果枝干輪紋病發病率高達77.6％；果實輪紋病在一般年份發病率為5％～20％，大發生年份爛果率達80％以上。2013年，山東部分蘋果產區，套袋栽培蘋果輪紋爛果率為20％～30％，重病果園爛果率高達70％以上。有效控制蘋果輪紋病，對于保證我國蘋果產業健康可持續發展具有重要意義。

目前，防治蘋果輪紋病以化學藥劑保護為主，化學殺菌劑具有高效、成本低、操作簡便，但在防治病害的同時也對環境和人類健康可能具有潛在的風險和影響。采用生防菌劑防治蘋果輪紋病對環境友好，可以避免化學防治帶來的一系列問題。生防菌劑可減少或替代化學藥劑的使用，從而達到防治蘋果枝干和果實輪紋病的目的。現有技術中還沒有采用丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)用于蘋果輪紋病防治的報道。如何解決上述技術問題，是目前微生物技術領域需要解決的技術問題。

發明內容

本發明所提供的丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)B-1，于2015年12月31日保藏于：中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC NO:M2015813，保藏地址為：湖北省武漢市，洪山區八一路。

本發明所提供的丁香假單胞菌(Pseudomonas syringae)菌株B-1制備的生防菌劑，是菌株B-1發酵上清液或菌株B-1菌懸液。

本發明所提供的生防菌劑用于果蔬病害防治。

本發明所提供的生防菌劑用于蘋果輪紋病的防治。

本發明所提供的生防菌劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)將菌株B-1劃線接種在NA培養基中，于30℃恒溫活化培養24h，得到活化的菌株B-1單菌落A；

(2)將所述活化的菌株B-1單菌落A，接種于裝瓶量80mL/250mL的NB培養基中，180r·min^-1，30℃恒溫震蕩培養12h，得到菌株B-1發酵種子液B；

(3)將所述發酵種子液B按1:100的接種量接種到NB培養基中擴大培養，30℃恒溫震蕩培養24h，得到10⁹cfu·mL^-1B-1菌株的細胞培養液C；

(4)將10⁹cfu·mL^-1B-1菌株的細胞培養液C，在4℃條件下，12000r·min^-1離心15min，收集上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，得到菌株B-1發酵上清液，即為生防菌劑；菌體沉淀用無菌水重新懸浮，得到10⁹cfu·mL^-1的菌懸液，即為生防菌劑。