[發(fā)明專利]焦谷氨酸作為判斷代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的質(zhì)檢指示物的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010098492.8
• 申請(qǐng)日: 2020-02-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111239283A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李琰;克里茲托夫;杰斯蒂娜;但聰慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳脈圖精準(zhǔn)技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京尚誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

1.焦谷氨酸作為判斷代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的質(zhì)檢指示物的應(yīng)用，通過(guò)所述焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本中的相對(duì)含量來(lái)判斷代謝組學(xué)血液樣本的質(zhì)量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本中的相對(duì)含量由焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本中的含量與在基準(zhǔn)中的含量的比值來(lái)表示，當(dāng)該比值不超過(guò)1.036時(shí)，優(yōu)選為0.549-1.036時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為0.549-0.761時(shí)，所述代謝組學(xué)血液樣本的質(zhì)量符合要求；其中所述基準(zhǔn)為NIST SRM1950人冰凍血漿。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本中的含量和焦谷氨酸在所述基準(zhǔn)中的含量通過(guò)以下中的任一種方式測(cè)定：液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)、氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，當(dāng)采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)測(cè)定焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本中的含量或測(cè)定焦谷氨酸在基準(zhǔn)中的含量時(shí)，具體包括以下步驟：

1)從代謝組學(xué)血液樣本或基準(zhǔn)中提取血漿樣品，將冷(甲基叔丁基醚：甲醇，體積比3:1)溶液加入血漿，渦旋混勻后進(jìn)行冰浴孵育；

2)冰浴中存放，加入(甲醇：水，體積比3：1)溶液，渦旋并離心分層；

3)樣品分層后，取下層有機(jī)相至試管中；

4)向步驟3)中的試管中加入冰甲醇，沉淀蛋白質(zhì)；

5)蛋白質(zhì)沉淀后，將試管離心，取上清液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的試管中，并干燥過(guò)夜；干燥后獲得待測(cè)物質(zhì)的樣品管；

6)向樣品管中加入水，并在室溫下孵化；

7)孵化后，將試管渦旋混勻，超聲輔助處理，再將試管在室溫下離心；

8)從試管中取上清液至玻璃進(jìn)樣小瓶中，上機(jī)測(cè)定，獲得質(zhì)譜數(shù)據(jù)；

9)由質(zhì)譜數(shù)據(jù)中測(cè)量焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本或基準(zhǔn)中的峰面積，分別作為焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本或基準(zhǔn)中的含量。

5.代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的監(jiān)控方法，其特征在于，對(duì)代謝組學(xué)血液樣本和基準(zhǔn)中的焦谷氨酸進(jìn)行檢測(cè)，以焦谷氨酸在該代謝組學(xué)血液樣本中和基準(zhǔn)中的含量比值作為判斷代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的指標(biāo)，其中所述基準(zhǔn)為NIST SRM1950人冰凍血漿。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的監(jiān)控方法，其特征在于，所述檢測(cè)采用以下任一種方式：液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)、氣相色譜質(zhì)譜(GC-MS)。

7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的監(jiān)控方法，其特征在于，所述含量比值不超過(guò)1.036時(shí)(優(yōu)選為0.549-1.036時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為0.549-0.761時(shí))，判斷代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量符合要求。

8.根據(jù)權(quán)利要求5或6或7所述的代謝組學(xué)血液樣本質(zhì)量的監(jiān)控方法，其特征在于，所述檢測(cè)采用液相色譜質(zhì)譜(LC-MS)方法測(cè)定焦谷氨酸在代謝組學(xué)血液樣本和基準(zhǔn)中的含量時(shí)，具體包括權(quán)利要求4提及的步驟。

9.血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，對(duì)代謝組學(xué)血液樣本中的多種代謝化合物進(jìn)行檢測(cè)得到血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果，同步按權(quán)利要求4的方法測(cè)定焦谷氨酸在基準(zhǔn)中的含量；從代謝化合物檢測(cè)結(jié)果中按權(quán)利要求4的步驟9)獲取焦谷氨酸的含量，計(jì)算焦谷氨酸在該血液樣本中的含量和在基準(zhǔn)中的含量比值；將該含量比值作為評(píng)價(jià)血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果是否可用的指標(biāo)，含量比值不超過(guò)1.036時(shí)(優(yōu)選為0.549-1.036時(shí)，進(jìn)一步優(yōu)選為0.549-0.761時(shí))，該血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果可用，否則，該血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果不可用；其中所述基準(zhǔn)為NIST SRM1950人冰凍血漿。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)方法，其特征在于，對(duì)代謝組學(xué)血液樣本中的多種代謝化合物進(jìn)行檢測(cè)具體包括以下步驟：

(1)從代謝組學(xué)血液樣本提取血漿樣本，將冷(甲基叔丁基醚：甲醇，體積比3:1)溶液加入血漿，渦旋混勻后進(jìn)行冰浴孵育；

(2)冰浴中存放，加入(甲醇：水，體積比3：1)溶液，渦旋并離心分層；

(3)樣品分層后，取上層有機(jī)相轉(zhuǎn)移至試管中，干燥，獲得脂質(zhì)類物質(zhì)，用于LC-MS脂質(zhì)組檢測(cè)，命名為脂質(zhì)管；

(4)取下層有機(jī)相至試管中；

(5)向步驟4)中的試管中加入冰甲醇，沉淀蛋白質(zhì)；

(6)步驟5)中蛋白質(zhì)沉淀后，將試管離心，取上清液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的試管中，并干燥過(guò)夜；干燥后獲得極性化合物類物質(zhì)，用于LC-MS極性組檢測(cè)，命名為極性管；

(7)脂質(zhì)管和極性管中分別加入，并在室溫下孵化；

(8)孵化后，將試管渦旋混勻，超聲輔助處理，再將試管在室溫下離心；

(9)從各試管中分別取上清液至玻璃進(jìn)樣小瓶中，使用液相色譜-質(zhì)譜儀采集數(shù)據(jù)信息上機(jī)測(cè)定，獲得各代謝化合物的LC-MS檢測(cè)數(shù)據(jù)；

(10)根據(jù)各代謝化合物的LC-MS檢測(cè)數(shù)據(jù)，將各代謝化合物的提取離子流色譜圖的峰面積定義為各化合物在代謝組學(xué)血液樣本中的含量，集合作為血液樣本代謝組學(xué)檢測(cè)結(jié)果。