[發明專利]一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑及其應用

在審

• 申請號: 202010095654.2
• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111534634A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 冀君;陳欽璽;胡雯;許鑫;慕新浩;張志斌;李宛玉;闞云超;姚倫廣
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 陸菊華

1.用于檢測Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增引物組，其特征在于，所述引物組由以下引物組成：

上游內引物FIP：

CGAGGGCATTGTAGGCGGTG-GAATTC-GGGTACCCTAGACAGAGGC；

下游內引物BIP：

CCAAGGCCGGGGCTAACAAC-GGCACCTGGGCTAAAGTG；

上游外引物F3：GCTGGACATGGCCAGTAC；

下游外引物B3：TCACAGTTATGGCACCTGC；

加速上游環狀引物LF1:CCGCTGTAAGGCTTGAAGGAG

加速下游環狀引物LB1:CTTTTTAATGGACAGGGTGCCAATA。

2.一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑，所述試劑為Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫檢測試劑，其特征在于，所述試劑包括權利要求1中所述的引物組。

3.根據權利要求2所述的可視化等溫擴增檢測試劑，其特征在于，所述試劑還包括如下組分：10×反應緩沖液、dNTPs、Mg²⁺、Bst DNA聚合酶、去離子水、模板DNA和顯色試劑。

4.根據權利要求3所述的可視化等溫擴增檢測試劑，其特征在于，所述試劑中Mg²⁺的濃度為6mmol·L^-1。

5.根據權利要求3所述的可視化等溫擴增檢測試劑，其特征在于，所述試劑中dNTPs的濃度為1.5mmol·L^-1；作為優選，所述試劑中顯色試劑為酚紅與甲酚紅混合指示劑。

6.根據權利要求3所述的可視化等溫擴增檢測試劑，其特征在于，所述試劑還包括陽性對照。

7.一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑盒，所述試劑盒為Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求2-6中任一項所述的可視化等溫擴增檢測試劑。

8.權利要求2-6任一項所述的檢測試劑或權利要求7所述的檢測試劑盒在如下任一種條件下的應用：

一、不以疾病的診斷和治療為目的的檢測或輔助檢測Ⅱ型犬腺病毒；

二、制備用于檢測或輔助檢測Ⅱ型犬腺病毒的產品；

三、不以疾病的診斷和治療為目的的檢測或輔助檢測待測動物樣品是否感染Ⅱ型犬腺病毒；

四、制備用于檢測或輔助檢測待測動物樣品是否感染Ⅱ型犬腺病毒的產品；

五、不以疾病的診斷和治療為目的的檢測待測病毒是否為Ⅱ型犬腺病毒；

六、制備用于檢測或輔助檢測待測病毒是否為Ⅱ型犬腺病毒的產品。

9.一種檢測或輔助檢測待測動物樣品是否感染Ⅱ型犬腺病毒的方法，該方法不以疾病的診斷和治療為目的，其特征在于，包括以下步驟：

反應步驟：從待測動物肛門、唾液或淚腺分泌物拭子樣品提取基因組DNA作為模板，采用權利要求2-6任一項所述的檢測試劑或權利要求7所述的檢測試劑盒進行環介導等溫擴增，得到擴增產物；作為優選，所述環介導等溫擴增的反應條件為：恒溫63℃，反應40min；

確認步驟：按照下述任一方法確定待測動物樣品是否感染Ⅱ型犬腺病毒：

A、擴增產物呈現橙黃色則待測動物樣品感染Ⅱ型犬腺病毒；擴增產物呈現紫紅色則待測動物樣品未感染Ⅱ型犬腺病毒；

B、將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳條帶呈梯狀分布，則待測動物樣品感染Ⅱ型犬腺病毒；僅有一條引物條帶，則待測動物樣品未感染Ⅱ型犬腺病毒。

10.一種檢測或輔助檢測待測病毒為Ⅱ型犬腺病毒的方法，該方法不以疾病的診斷和治療為目的，其特征在于，包括以下步驟：

反應步驟：從待測病毒中提取基因組DNA作為模板，采用權利要求2-6任一項所述的檢測試劑或權利要求7所述的檢測試劑盒進行環介導等溫擴增，得到擴增產物；作為優選，所述環介導等溫擴增的反應條件為：恒溫63℃，反應40min；

確認步驟：按照下述任一方法確定待測病毒是否為Ⅱ型犬腺病毒：

A、擴增產物呈現橙黃色則待測病毒是Ⅱ型犬腺病毒；擴增產物呈現紫紅色則待測病毒不是Ⅱ型犬腺病毒；

B、將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳條帶呈梯狀分布，則待測動物病毒是Ⅱ型犬腺病毒；僅有一條引物條帶，則待測病毒不是Ⅱ型犬腺病毒。