[發明專利]一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑及其應用

在審

• 申請號: 202010095654.2
• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111534634A
• 公開（公告）日: 2020-08-14
• 發明（設計）人: 冀君;陳欽璽;胡雯;許鑫;慕新浩;張志斌;李宛玉;闞云超;姚倫廣
• 申請（專利權）人: 南陽師范學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 陸菊華

本發明提供了一種Ⅱ型犬腺病毒(CAV?2)的可視化等溫擴增檢測試劑，涉及病毒檢測技術領域。本發明根據CAV?2基因保守區設計合成特異性LAMP引物，包括上游內引物FIP、下游內引物BIP、上游外引物F3和下游外引物B3，檢測試劑還包括如下組分：10×反應緩沖液、dNTPs、Mg²⁺、Bst DNA聚合酶、去離子水、顯色試劑和上述引物。本發明提供的檢測試劑在應用時具有特異性強、靈敏性高、操作簡便、成本低廉等優點。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，特別是涉及一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑及其應用。

背景技術

犬腺病毒(Canine adenovirus,CAV)屬于腺病毒科哺乳動物腺病毒屬的成員之一，是一種無囊膜的直徑為80-110nm的顆粒，其衣殼蛋白呈20面體結構。CAV-2感染廣泛流行于犬科動物中，主要引起犬的傳染性喉氣管炎和腸炎，以三月齡至一歲的犬科動物的感染率最高。由于此年齡階段，幼犬體內來自母體抗體水平下降，加上環境污染和預防不及時，一旦感染對機體產生極大損傷。感染后多表現為高熱、咳嗽、漿液性至粘液性鼻漏，扁桃體炎、喉氣管炎和肺炎。其病理變化表現為肺膨脹不全、充血，且有出血點，并伴有不同程度的肝臟病變，表現為肝臟腫大，有纖維素性滲出物，支氣管淋巴結充血、淤血。CAV-2與犬瘟熱病毒(CDV)或其他病毒性疾病混合感染時，容易引起繼發病癥，增加宿主死亡風險。CAV-2病毒感染動物模型用于研究病毒重要基因在病毒感染過程的作用以及篩選毒株，以期為研究Ⅱ型犬腺病毒病的發病機理、評價和預測抗病毒藥物的療效提供重要依據。

核酸擴增是基因診斷技術中最常用的方法之一，目前核酸擴增的方法有聚合酶鏈式反應(PCR)、依賴核酸序列擴增(NASBA)、自主序列復制(SR)以及鏈置換技術(SDA)等，都能將微量標本進行快速擴增，但在特異性、簡便程度、溫度和試劑儀器要求等方面各有缺點。現有技術在Ⅱ型犬腺病毒研究的普通檢測中，具有效率低、難操作、成本高、在生產實際中難以推廣的缺陷。

發明內容

本發明的一個目的是要提供Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑及其應用，縮短了檢測時間，提高了特異性和敏感性，以及提高了操作的方便性、降低了成本。

特別地，本發明提供了用于檢測Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增引物組，所述引物組由以下引物組成：

上游內引物FIP：

CGAGGGCATTGTAGGCGGTG-GAATTC-GGGTACCCTAGACAGAGGC；

下游內引物BIP：

CCAAGGCCGGGGCTAACAAC-GGCACCTGGGCTAAAGTG；

上游外引物F3：GCTGGACATGGCCAGTAC；

下游外引物B3：TCACAGTTATGGCACCTGC；

加速上游環狀引物LF1:CCGCTGTAAGGCTTGAAGGAG

加速下游環狀引物LB1:CTTTTTAATGGACAGGGTGCCAATA。

一種Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫擴增檢測試劑，所述試劑為Ⅱ型犬腺病毒的可視化等溫檢測試劑，所述試劑包括上述的引物組。

優選的，所述試劑還包括如下組分：10×反應緩沖液、dNTPs、Mg²⁺、BstDNA聚合酶、去離子水、模板DNA和顯色試劑。

優選的，所述試劑中Mg²⁺的濃度為6mmol·L^-1。

優選的，所述試劑中dNTPs的濃度為1.5mmol·L^-1；作為優選，所述試劑中顯色試劑為酚紅與甲酚紅混合指示劑。