[發明專利]一種利用重組海藻糖合成酶合成海藻糖的方法

在審

• 申請號: 202010093045.3
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111172089A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 饒志明;吳傲;張顯;楊套偉;徐美娟;邵明龍
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N9/90;C12N15/77;C12P19/24;C12P19/12;C12R1/15
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.一種重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于，以谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)為宿主，表達編碼海藻糖合成酶的基因；所述海藻糖合成酶的來源包括天藍色鏈霉菌(Streptomyces coelicolor)、谷氨酸棒桿菌或水棲嗜熱菌(Thermus aquaticus)。

2.根據權利要求1所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于，所述海藻糖合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10中的任一所示。

3.根據權利要求1所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于，所述宿主包括谷氨酸棒桿菌ATCC 13032。

4.根據權利要求1-3任一所述的重組谷氨酸棒桿菌，其特征在于，所述重組谷氨酸棒桿菌以pXMJ19或pDXW-10為載體。

5.應用權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌發酵生產海藻糖合成酶的方法，其特征在于，所述發酵的條件是25-35℃、180-200r·min^-1。

6.一種生產海藻糖的方法，其特征在于，將含權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌的酶蛋白加入到麥芽糖溶液中，于32-38℃、200-220r·min^-1的條件下進行反應制備海藻糖。

7.一種可用于生產海藻糖的制劑，其特征在于，所述制劑的成分包含權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌。

8.構建權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌的方法，其特征在于，所述方法是用pXMJ19或pDXW-10與編碼海藻糖合成酶的基因構建重組質粒，首先導入到大腸桿菌BL21(DE3)中進行重組質粒和海藻糖合成酶表達的驗證，再從得到的重組大腸桿菌中提取驗證正確且可正常表達的重組質粒，轉化到谷氨酸棒桿菌中；所述海藻糖合成酶的來源包括天藍色鏈霉菌、谷氨酸棒桿菌或水棲嗜熱菌。

9.根據權利要求8所述的方法，所述轉化是應用電轉轉化法進行的。

10.權利要求1-4任一所述的重組谷氨酸棒桿菌在食品、制藥或化工領域中的應用。