[發明專利]一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測方法

在審

• 申請號: 202010092889.6
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111323469A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 王德強;劉千山;王亮;王赟姣;王涵
• 申請（專利權）人: 中國科學院重慶綠色智能技術研究院;中國科學院大學
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;C07K16/00;C07K1/12
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發明涉及一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測方法，屬于生物檢測領域。本發明公開了一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M(IgM)檢測方法，首先將免疫球蛋白在還原劑的作用下通過水解反應還原得到水解免疫球蛋白M樣品即蛋白片段，能夠與含有電化學檢測分析裝置的納米孔而產生分子間的相互作用，從而產生相應的特征電流信號，進而分析得到免疫球蛋白的檢測結果，解決了在免疫球蛋白M(IgM)常規檢測中由于易于吸附或堵塞納米孔而導致的檢測信號不穩定、靈敏度低等問題，簡化檢測操作流程、提高檢測結果，可有效提高納米孔檢測的可靠性，實現高特異性、高靈敏檢測分析的特點。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測方法。

背景技術

免疫球蛋白M(IgM)通常稱為巨球蛋白，是免疫球蛋白中分子量最大的一種。免疫球蛋白M(IgM)是在個體發育過程中最早產生，同時經抗原刺激后最先出現的抗體蛋白，主要存在于血液中，但維持時間短，消失快。免疫球蛋白M在胎兒3個月后即開始合成，但含量很低，1～2歲時含量達到成人水平。免疫球蛋白M的含量檢測分析，有助于傳染病的早期診斷。

目前基于免疫反應的檢測方法操作繁瑣，需要熒光標記；其帶來的不均一性和不穩定性影響了這類指標在臨床診斷中的意義。而基于納米孔的檢測分析方法，可以在單分子水平上無需標記，直接實現免疫球蛋白快速，超靈敏檢測分析，可以避免免疫球蛋白M在合成初期水平低的缺點。為避免免疫球蛋白M由于吸附或堵孔現象而導致的檢測信號不穩定，實現對免疫球蛋白M的快速、靈敏檢測是目前納米孔檢測技術面臨的關鍵技術難點。

因此，需要研究一種全新的基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M的有效檢測方法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的之一在于提供一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測方法；本發明的目的之二在于提供一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測裝置。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、一種基于納米孔水解反應的免疫球蛋白M檢測方法，所述方法包括如下步驟：

(1)制備儲備液：將免疫球蛋白M溶于pH＝7.5的PBS緩沖液中制備得到濃度為33μM的儲備液；

(2)制備水解免疫球蛋白M樣品：將步驟(1)中制備的儲備液加入搖床中，加入水解反應還原劑對免疫球蛋白M進行水解，即可得到水解免疫球蛋白M樣品，在-20℃的冰箱中保存待用；

(3)電學檢測分析：將步驟(2)中制備的水解免疫球蛋白M樣品置于含有納米孔的電化學檢測分析裝置中，在外加電場的作用下進行分析檢測，采集得到電流信號；

(4)分析檢測結果：將步驟(3)中的電流信號進行分析處理即可得到免疫球蛋白M的檢測結果。

優選的，步驟(2)中所述水解反應還原劑為三(2-羧乙基)膦(TCEP)；所述水解反應還原劑與免疫球蛋白M的摩爾比為1～3:1。

優選的，步驟(3)中所述納米孔為生物納米孔或固態納米孔；所述納米孔設置在電化學檢測分析裝置的支撐薄膜上，所述納米孔的孔徑為1～5nm。

優選的，所述支撐薄膜的材料為氮化硅、二硫化鉬、二硫化鎢、石墨烯、氧化石墨烯或玻璃納米管中的任意一種。

優選的，步驟(3)中所述電化學檢測分析裝置中的電解質為氯化鉀水溶液、氯化鈉水溶液、氯化鋰水溶液、磷酸緩沖液或離子液體中的任意一種；所述電解質的濃度為0.5～1mol/L。

優選的，所述分析處理為對產生的電學信號的幅值和電流阻滯時間的分析。