[發(fā)明專利]一種基于納米孔水解反應(yīng)的免疫球蛋白M檢測方法

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• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111323469A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王德強;劉千山;王亮;王赟姣;王涵
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院重慶綠色智能技術(shù)研究院;中國科學(xué)院大學(xué)
• 主分類號: G01N27/416
• 分類號: G01N27/416;C07K16/00;C07K1/12
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.一種基于納米孔水解反應(yīng)的免疫球蛋白M檢測方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)制備儲備液：將免疫球蛋白M溶于pH＝7.5的PBS緩沖液中制備得到濃度為33μM的儲備液；

(2)制備水解免疫球蛋白M樣品：將步驟(1)中制備的儲備液加入搖床中，加入水解反應(yīng)還原劑對免疫球蛋白M進行水解，即可得到水解免疫球蛋白M樣品，在-20℃的冰箱中保存待用；

(3)電學(xué)檢測分析：將步驟(2)中制備的水解免疫球蛋白M樣品置于含有納米孔的電化學(xué)檢測分析裝置中，在外加電場的作用下進行分析檢測，采集得到電流信號；

(4)分析檢測結(jié)果：將步驟(3)中的電流信號進行分析處理即可得到免疫球蛋白M的檢測結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中所述水解反應(yīng)還原劑為三(2-羧乙基)膦；所述水解反應(yīng)還原劑與免疫球蛋白M的摩爾比為1～3:1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述納米孔為生物納米孔或固態(tài)納米孔；所述納米孔設(shè)置在電化學(xué)檢測分析裝置的支撐薄膜上，所述納米孔的孔徑為1～5nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述支撐薄膜的材料為氮化硅、二硫化鉬、二硫化鎢、石墨烯/氧化石墨烯或玻璃納米管中的任意一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中所述電化學(xué)檢測分析裝置中的電解質(zhì)為氯化鉀溶液、氯化鈉溶液、氯化鋰溶液、磷酸緩沖液或離子液體中的任意一種；所述電解質(zhì)的濃度為0.5～1mol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述分析處理為對產(chǎn)生的電學(xué)信號的幅值和電流阻滯時間的分析。

7.一種基于納米孔水解反應(yīng)的免疫球蛋白M檢測裝置，其特征在于，所述裝置包括電源、電流計、含有納米孔的電解質(zhì)溶液腔室；所述電源的負(fù)極、電流計、含有納米孔的電解質(zhì)溶液腔室、電源的正極依次相連。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的裝置，其特征在于，所述含有納米孔的電解質(zhì)溶液腔室中的納米孔置于支撐薄膜上，所述支撐薄膜將電解質(zhì)溶液腔室分為獨立的通過納米孔相連的兩個部分。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的裝置，其特征在于，所述支撐薄膜的材料為氮化硅、二硫化鉬、二硫化鎢、石墨烯/氧化石墨烯或玻璃納米管中的任意一種。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的裝置，其特征在于，所述電解質(zhì)溶液腔室中含有電解質(zhì)，所述電解質(zhì)為濃度為0.5～1mol/L的氯化鉀溶液、氯化鈉溶液、氯化鋰溶液、磷酸緩沖液或離子液體中的任意一種。