[發明專利]一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白、試紙條及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010092791.0
• 申請日: 2020-02-14
• 公開（公告）號: CN111303297B
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 何昆侖;田亞平;張思兵;周建平;周裕軍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院;北京丹大生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發明涉及一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白、試紙條及制備方法和應用，屬于病毒檢測技術領域。本發明所述雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本發明所述重組蛋白為2019?nCoV多個優勢表位的融合蛋白，能夠制備得到抗原雙夾心法2019?nCoV病毒抗體檢測試劑，可實現常溫保存，且能夠快速、高靈敏度、高通量、低儀器成本、單人份隨時檢測，操作簡便，可大大提高臨床使用簡便性。

技術領域

本發明涉及病毒檢測技術領域，具體涉及一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒(2019-nCoV)抗體的重組蛋白、試紙條及制備方法和應用。

背景技術

冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起感冒、中東呼吸綜合征(MERS)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴重疾病。新型冠狀病毒是以前從未在人體中發現的冠狀病毒新毒株，2019-nCoV是人類分離的第七類冠狀病毒。相關疾病監測，發現多起病毒性肺炎病例，均診斷為病毒性肺炎/肺部感染。

新型冠狀病毒感染人體后一般有3～14天(有個別案例報道最長24天)的潛伏期，潛伏期內可無臨床癥狀，不易發現。目前的證據表明，潛伏期感染者也有傳染性，增大了阻斷病毒傳播的難度。新型冠狀病毒感染臨床癥狀主要表現為發熱、咳嗽、乏力等非特異癥狀，與普通感冒難以區分，其確診依賴實驗室診斷技術。

目前新型冠狀病毒感染診斷主要依賴基于聚合酶鏈式反應(PCR)或核酸測序檢測病毒特異性基因序列來進行。但是核酸診斷需要有特殊的實驗室(要求有4個在物理空間上完全相互獨立的區域)和數十種配套設備以及專業操作人員(需認證)才能完成，且檢測過程操作復雜，需要數小時才能完成；極易產生氣溶膠污染，造成假陽性，也存在因為取樣不合適造成漏檢的情況，因此核酸檢測不適合現場大規模開展。

免疫學診斷主要是通過抗原抗體免疫反應檢測人體感染病毒以后產生的特異性抗體來診斷。免疫學診斷方法具有操作簡單、檢測速度快、無需特殊場地及(復雜)儀器設備，且敏感性高等優點，適用于現場大規模開展新型冠狀病毒感染篩查及診斷工作。免疫學診斷已報道的方法學主要是膠體金法，ELISA等，檢測血液中的病毒特異性IgM和IgG抗體，屬于間接法，采用抗原和抗人免疫球蛋白二抗構建檢測系統，受基質Ig影響比較大，特異性差，靈敏度也不理想。雙抗原夾心法靈敏度高，特異性強，但是目前市面上和文獻還未有比較理想的針對2019-nCoV的雙抗原夾心的原料的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白、試紙條及制備方法和應用。本發明所述重組蛋白為2019-nCoV多個優勢表位的融合蛋白，能夠制備得到抗原雙夾心法2019-nCoV病毒抗體檢測試劑，可實現常溫保存，且能夠快速、高靈敏度、高通量、低儀器成本、單人份隨時檢測，操作簡便，可大大提高臨床使用簡便性。

本發明提供了一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了一種雙抗原夾心法檢測2019新型冠狀病毒抗體的試紙條，包括底板以及依次搭接粘貼在底板上的樣品吸收墊、熒光微球墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述熒光微球墊噴涂有熒光微球標記的2019新型冠狀病毒多優勢表位融合蛋白，所述硝酸纖維素膜上固定有檢測區和質控區，所述檢測區噴涂有2019新型冠狀病毒多優勢表位融合蛋白，所述質控區噴涂有抗N蛋白抗體；所述2019新型冠狀病毒多優勢表位融合蛋白為上述技術方案所述的重組蛋白。

優選的是，所述試紙條檢測的樣本包括唾液、尿液、血清、血漿和全血樣本。

優選的是，所述試紙條還包括樣本稀釋液；所述樣本稀釋液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的濃度為0.008～0.012mol/L；所述樣本稀釋液中Tween-20的體積含量為0.4％～0.6％。