[發(fā)明專利]一種雙抗原夾心法檢測(cè)2019新型冠狀病毒抗體的重組蛋白、試紙條及制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010092791.0
• 申請(qǐng)日: 2020-02-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111303297B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何昆侖;田亞平;張思兵;周建平;周裕軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院;北京丹大生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/569
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

1.一種雙抗原夾心法檢測(cè)新型冠狀病毒2019-nCoV抗體的重組蛋白，所述重組蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一種雙抗原夾心法檢測(cè)新型冠狀病毒2019-nCoV抗體的試紙條，包括底板以及依次搭接粘貼在底板上的樣品吸收墊、熒光微球墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，其特征在于，所述熒光微球墊噴涂有熒光微球標(biāo)記的新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白，所述硝酸纖維素膜上固定有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，所述檢測(cè)區(qū)噴涂有新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白，所述質(zhì)控區(qū)噴涂有抗N蛋白抗體；所述新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白為權(quán)利要求1所述的重組蛋白。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條檢測(cè)的樣本包括唾液、尿液、血清、血漿和全血樣本。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其特征在于，所述試紙條還包括樣本稀釋液；所述樣本稀釋液包括PB溶液和Tween-20；所述PB溶液的濃度為0.008～0.012mol/L；所述樣本稀釋液中Tween-20的體積含量為0.4％～0.6％。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試紙條，其特征在于，所述熒光微球?yàn)榫郾揭蚁┌⊥岭x子Eu+的微球，所述熒光微球表面有羧基基團(tuán)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2或5所述的試紙條，其特征在于，所述熒光微球的直徑為100～300nm。

7.權(quán)利要求2～6任一項(xiàng)所述試紙條的制備方法，包括以下步驟：

1)將活化的熒光微球與權(quán)利要求1所述重組蛋白混合偶聯(lián)，獲得熒光微球標(biāo)記的新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白；

2)將所述熒光微球標(biāo)記的新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白噴涂至玻璃纖維膜上獲得熒光微球墊；

3)將新型冠狀病毒2019-nCoV多優(yōu)勢(shì)表位融合蛋白和抗N蛋白抗體分別噴涂在硝酸纖維素膜的檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)獲得固定有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)的硝酸纖維素膜；

4)在底板上依次搭接地粘貼樣品吸收墊、熒光微球墊、固定有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)的硝酸纖維素膜和吸水墊，獲得試紙條。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述活化的熒光微球的制備方法包括以下步驟：將熒光微球與交聯(lián)劑和活化緩沖液混合震蕩20～40min，得到活化的熒光微球。

9.權(quán)利要求1所述重組蛋白或權(quán)利要求2～6任一項(xiàng)所述試紙條在制備新型冠狀病毒2019-nCoV檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。