[發明專利]一種用于新冠病毒核酸快速檢測的Cpf1試劑盒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010091557.6
• 申請日: 2020-02-13
• 公開（公告）號: CN111187856B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 王鑫杰;張玉;黃行許
• 申請（專利權）人: 上海科技大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦

本發明公開了一種用于新冠病毒SARS?CoV?2核酸快速檢測的Cpf1熒光試劑盒，包括適用于SARS?CoV?2快速檢測的Cpf1檢測體系和熒光報告體系。本發明中，針對SARS?CoV?2病毒orf1a、orf1b、N和E的4個基因，設計一系列特異性crRNA,可靈敏、特異檢測到SARS?CoV?2病毒核酸。本發明系首次采用Cpf1檢測新冠病毒SARS?CoV?2，具有靈敏度高、特異性強、耗時短、高通量、肉眼可直接判讀和不依賴大型實驗設備等優勢。這些優勢使得本發明開發的基于Cpf1熒光法方法方便用于臨床一線對新冠肺炎病毒SARS?CoV?2核酸的快速檢測和鑒定診斷。

技術領域

本發明涉及一種對新冠肺炎病毒核酸的快速檢測方法及試劑盒，更具體的說，涉及基于Cpf1熒光法檢測對新冠病毒SARS-CoV-2病毒核酸的快速診斷方法及其試劑盒，屬于生物技術領域。

背景技術

國際病毒分類委員會(ICTV)將新型冠狀病毒(2019-nCoV)的正式分類名為嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)。世界衛生組織(WHO)宣布，由這一病毒導致的疾病的正式名稱為COVID-19。

目前，對于新冠肺炎的診斷主要有病毒核酸分子檢測和胸部影像學檢測兩種。胸部影像學檢測，主要依賴于胸肺部CT成像結果進行判斷：早期呈現多發的小斑片影及間質改變，以肺外帶明顯，進而發展為雙肺多發磨玻璃影、浸潤影。嚴重者出現肺實變，甚至‘白肺’，胸腔積液少見。但是，胸肺部CT檢測，需要依賴于專業。在分子生物學的手段上，目前常用的辦法有兩種：病毒的基因測序和核酸檢測。二代測序因為可以檢測微量物質，但是大多數醫院沒有測序的設備和生物信息團隊來協助，并且成本高檢測周期也比較長，不適合做篩查。

現在的診斷方法依賴病毒核酸檢測：通過實時反轉錄聚合酶鏈式反應(real timereverse transcription PCR,rRT-PCR)鑒定。每個病例采集上、下呼吸道標本，如支氣管或肺泡灌洗液、深咳痰液，同時采集發病初期和發病14天后的血清。目前在符合疑似病例標準的基礎上，對痰液、咽拭子、下呼吸道分泌物等標本進行rRT-PCR檢測顯示SARS-CoV-2核酸陽性，即可確診SARS-CoV-2感染。rRT-PCR檢測病毒核酸主要受制于：試劑盒質量和能夠承擔臨床檢測的P3實驗室數量、P3實驗室設備的準確性和穩定性、能進行熟練穩定操作的工作人員人數、需要一些昂貴的實驗設備、并且檢測時間較長。

目前，尚沒有針對SARS-CoV-2感染有效治療手段或疫苗，疾病控制主要依賴與嚴格的物理隔離切斷傳播途徑，從而直接造成嚴重的經濟損失。鑒于SARS-CoV-2傳播途徑廣泛和傳播速度快，迫切需要病毒的快速診斷，這對于預防和確診該病非常重要。SARS-CoV-2準確快速的檢測，使得防疫檢疫決策可以當機立斷、立即處置，達到阻斷擴散風險的目的。