[發(fā)明專利]一種測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法

有效

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• 申請日: 2020-02-12
• 公開（公告）號: CN111175409B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃騰波;邱琦蕓;李紫薇
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳大學(xué);深圳大學(xué)龍華生物產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 深圳中一聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44414
• 代理人: 黃志云

1.一種測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，包括如下步驟：

配制蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品、奎尼酸標(biāo)準(zhǔn)品、谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品、琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)品、α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行高效液相色譜檢測得到標(biāo)準(zhǔn)圖譜，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲取各標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程；

配制番茄待測品；將所述番茄待測品在與所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的檢測條件下進行高效液相色譜檢測，獲得所述番茄待測品的色譜圖，根據(jù)所述番茄待測品的色譜圖的保留時間確定蘋果酸、檸檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的種類，并根據(jù)各種類的色譜峰面積計算得到所述番茄待測品中蘋果酸、檸檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的含量；

所述高效液相色譜檢測的條件如下：

檢測器為島津LC-16液相色譜儀檢測器；

色譜柱為C18色譜柱；

柱溫為30-50℃；

流動相溶液為pH 2.53的含0.5%甲醇的0.01M KH₂PO₄溶液；

洗脫時間為15~20 min；

檢測波長為210 nm；

所述流動相溶液的配制方法如下：

將1.3609gKH₂PO₄溶解于超純水中，加入5ml色譜級甲醇混合得到第一混合液；

用85%磷酸調(diào)節(jié)所述第一混合液的pH為2.53后，添加純凈水定容至1L，用組合式溶劑過濾器采用0.45μm微孔的濾膜進行過濾，再進行超聲脫氣處理，得到所述流動相溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測的條件如下：

所述C18色譜柱的規(guī)格為5 μm，4.6×250mm；

進樣量為10-30 μL；

洗脫流速為0.5~0.7 mL/min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，配制番茄待測品的步驟中，包括如下方法：

提供番茄樣品，收集所述番茄樣品的果肉；

將所述果肉加入超純水進行混合得到第一混合物，將所述第一混合物進行加熱處理后進行離心處理，收集第一混合物上清液；

將所述第一混合物上清液進行凍干處理，得到第一提取物；

將所述第一提取物加入超純水進行混合、過濾得到所述番茄待測品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，將所述果肉加入超純水進行混合得到第一混合物的步驟中，所述第一混合物的濃度為5~10 mg/mL。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，將所述第一混合物進行加熱處理的步驟中，所述加熱處理的溫度為70~80℃，加熱處理的時間為30~40分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，將所述第一混合物進行加熱處理后進行離心處理的步驟中，所述離心處理的條件為：離心處理的轉(zhuǎn)速為 10000 rcf~12000 rcf；離心處理的時間為20~25分鐘。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，將所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行高效液相色譜檢測得到標(biāo)準(zhǔn)圖譜，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲取各標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程的步驟中，將所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行逐級稀釋，配制至少5種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，將所述不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)稀釋液進行高效液相色譜檢測器檢測并得到標(biāo)準(zhǔn)圖譜，通過所述標(biāo)準(zhǔn)圖譜中的保留時間確定各標(biāo)準(zhǔn)品的種類，以各標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積與對應(yīng)的各標(biāo)準(zhǔn)品的濃度制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲取各標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測定番茄有機酸和酸性氨基酸混合物的高效液相色譜方法，其特征在于，包括如下步驟：

配制蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)品、奎尼酸標(biāo)準(zhǔn)品、谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)品、琥珀酸標(biāo)準(zhǔn)品、α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進行逐級稀釋，配制5 mg/mL、4 mg/mL、2 mg/mL、1 mg/mL、0.5 mg/mL、0.25 mg/mL、0.125 mg/mL、0.0625 mg/mL8種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)稀釋液，將所述不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)稀釋液進行高效液相色譜檢測并得到標(biāo)準(zhǔn)圖譜，并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲取各標(biāo)準(zhǔn)品的回歸方程；其中，所述色譜條件如下：檢測器為島津LC-16液相色譜儀檢測器；色譜柱選用C18色譜柱；柱溫為30~50℃；進樣量為10~30 μL；流動相溶液為pH 2.53的含0.5%甲醇的0.01M KH₂PO₄溶液；洗脫時間為15~20 min；洗脫流速為0.5~0.7 mL/min；

提供番茄樣品，收集所述番茄樣品的果肉；將所述果肉加入超純水進行萃取得到第一混合物，將所述第一混合物進行加熱處理后進行離心處理，收集第一混合物上清液；將所述第一混合物上清液進行濃縮處理，得到第一提取物；將所述第一提取物加入超純水進行混合、過濾得到所述番茄待測品；

將所述番茄待測品在與所述混合標(biāo)準(zhǔn)溶液相同的檢測條件下進行高效液相色譜檢測，獲得所述番茄待測品的色譜圖，根據(jù)所述番茄待測品的色譜圖的保留時間確定蘋果酸、檸檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的種類，并根據(jù)各種類的色譜峰面積計算得到所述番茄待測品中蘋果酸、檸檬酸、奎尼酸、谷氨酸、琥珀酸、α-酮戊二酸的含量。