[發明專利]用于間充質干細胞膜蛋白定性分析的組合物及方法和應用

在審

• 申請號: 202010086517.2
• 申請日: 2020-02-10
• 公開（公告）號: CN111235155A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 章毅;朱小立;伍婷;任靈杰;陳侃俊;劉曉浩;陳亮
• 申請（專利權）人: 章毅;中國干細胞集團上海生物科技有限公司;重慶市干細胞技術有限公司;中國干細胞集團海南博鰲附屬干細胞醫院有限公司;上海市干細胞技術有限公司;陜西省干細胞技術有限公司;蘇州市干細胞技術有限公司;三亞市干細胞技術有限公司
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12Q1/6844;G01N21/64
• 代理公司: 上海市海華永泰律師事務所 31302
• 代理人: 包文超

1.一種組合物，其特征在于包括：

SEQ ID No 1所示的寡聚脫氧核糖核苷酸鏈，其5′末端標記了熒光基團。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于所述組合物還包括鹽酸氯丙嗪。

3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于所述組合物還包括DMEM培養基，以及1mg/mL的BSA、10v/v％胎牛血清(FBS)、4.5g/L葡萄糖和5mM的MgCl₂之一種或幾種。

4.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的寡聚脫氧核糖核苷酸鏈與膜蛋白為CD44結合。

5.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于所述的熒光基團為Cy5。

6.一種權利要求1～5之一所述的組合物在對靶標細胞實施原位成像的定性分析中應用。

7.一種權利要求1～5之一所述的組合物在對間充質干細胞膜蛋白CD44定性分析中應用。

8.一種權利要求1～5之一所述的組合物在對間充質干細胞無損分析中應用。

9.一種試劑盒，其特征在于包括權利要求1～5之一所述的組合物。

10.一種以權利要求1～5之一所述的組合物對靶標細胞實施定性分析的方法，其特征在于包括如下步驟：

首先，將所述的寡聚脫氧核糖核苷酸鏈溶解到緩沖液，加熱到95℃保持5分鐘使其變性，然后冷卻至室溫以形成DNA二級結構；

之后，將100μM的CPM添加到培養基中，并在二氧化碳恒溫細胞培養箱中與細胞孵育30分鐘；

接著，用緩沖液輕輕洗滌兩次除去含CPM的培養基，然后將含有150nM的Apt-Pri的適體-蛋白質結合緩沖液和細胞在37℃下孵育60分鐘；

最后，在共聚焦激光掃描顯微鏡下成像，實現靶標細胞膜蛋白原位成像的定性分析；

所述的Apt-Pri的適體-蛋白質結合緩沖液為DMEM培養基。

11.根據權利要求10所述的方法，其特征在于所述的Apt-Pri的適體-蛋白質結合緩沖液含4.5g/L葡萄糖。

12.根據權利要求10所述的方法，其特征在于所述的Apt-Pri的適體-蛋白質結合緩沖液含1mg/mL的BSA、10v/v％FBS和5mM的MgCl₂之一種或幾種。