[發明專利]檢測人葉酸代謝基因多態性的組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010086470.X
• 申請日: 2020-02-11
• 公開（公告）號: CN111187828B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 龍鳳英;吳康;繆為民;戴立忠
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 黃景輝;張穎玲

本發明涉及分子生物學檢測領域，更具體的，涉及葉酸代謝能力檢測領域。提供了一種組合物，其檢測葉酸代謝能力；與此同時，還提供了所述組合物用于檢測葉酸代謝能力的用途、包含所述組合物的試劑盒以及用于檢測葉酸代謝能力的方法，使用本發明的組合物以及方法，可以實現一種通道同時檢測兩種SNP類型，實現了一管多測，節約了時間和成本，并且使得上機檢測的樣本能夠增加。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，更具體的，屬于人葉酸代謝基因多態性檢測領域。

背景技術

葉酸是一種水溶性B族維生素，其代謝產生的活性結構-四氫葉酸，是影響體內同型半胱氨酸代謝的最主要因素。全世界已經公認，婦女圍孕期增補葉酸可以預防胎兒神經管缺陷(NTDs)的初發及再發。由于葉酸與DNA的合成密切相關，婦女圍孕期若攝入葉酸不足，則會導致同型半胱氨酸(HCY)向甲硫氨酸轉化出現障礙，導致高HCY血癥或低甲硫氨酸血癥。高HCY血癥可引起血管內皮損傷、促進血管平滑肌細胞增生，同時引起凝血和纖溶系統功能失調，使血液處于高凝狀態。近年來研究發現，血漿中HCY水平升高與習慣性流產、胎盤早剝、胎兒生長受限、胎兒畸形、死胎、早產、低體重兒等現象的發生密切相關。此外，有研究證明婦女在懷孕的前6周內如果攝入葉酸不足，則生育無腦兒和腦脊柱裂的畸形兒的可能性會增加4倍。

同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)是由甲硫氨酸(methionine)脫甲基分解產生的一種具有細胞毒性的含硫氨基酸，在代謝過程中由于N5,10～亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(MTRR)的活性低則會導致血漿Hcy含量增高，引起高同型半胱氨酸血癥(HHcy)，而SLC19A1?A80G位點突變可引起葉酸轉運缺陷，進而使得對正在發育的胚胎，特別是葉酸穿過胎盤的運輸有重要影響。而HHcy是心腦血管疾病、早產、腦梗死、唇腭裂、神經管畸形等的危險因子。對人類體細胞MTHFR基因的C677T、A1298C基因多態性、MTRR基因的A66G基因多態性以及SLC19A1基因的A80G基因多態性做檢測，可以發現不同個體對葉酸的吸收利用水平，實現個性化增補葉酸。

中國專利公開CN110257507A公開了一種孕期葉酸代謝檢測方法，其中涉及MTHFRC677T位點、MTHFR?A1298C位點(MTHFR?S2位點)、MTRR?A66G位點(MTRR?S2位點)和SLC19A1A80G位點(SLC19A1S1位點)。但是其采用多重PCR-LDR技術結合遺傳分析儀的毛細管電泳技術進行檢測，此方法需要專業人員才能進行，并且所需檢測時間較長，成本較高。因此，針對此問題，現有技術當中采用熒光定量PCR進行檢測，中國公開CN108034710A公開了一種基于熒光定量PCR檢測MTHFR?C677T位點、MTHFR?A1298C位點、MTRR?A66G位點的方法，但其一個通道只能檢測一種SNP類型，并且其只能實現一管一測，不能實現一管多測，使得上機檢測樣本受到限制，同時其也未能檢測SLC19A1?A80G位點。

有鑒于此，本領域需要一種檢測位點全面，可以實現一管多測，從而節約時間和成本，并且使得上機檢測的樣本增加的產品。

發明內容

有鑒于此，第一方面，本發明的提供一種能夠檢測葉酸代謝能力的組合物，所述組合物包括：

第一組：檢測MTHFR?C677T位點的寡核苷酸，包括：如SEQ?ID?NO:1所示的上游引物、如SEQ?ID?NO:2所示的下游引物，以及如SEQ?ID?NO:3和4所示的探針，和檢測MTRR?A66G位點的寡核苷酸，包括：如SEQ?ID?NO:5所示的上游引物、如SEQ?ID?NO:6所示的下游引物，以及如SEQ?ID?NO:7和8所示的探針；