[發明專利]檢測人葉酸代謝基因多態性的組合物、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202010086470.X
• 申請日: 2020-02-11
• 公開（公告）號: CN111187828B
• 公開（公告）日: 2023-09-15
• 發明（設計）人: 龍鳳英;吳康;繆為民;戴立忠
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 黃景輝;張穎玲

1.一種能夠檢測葉酸代謝能力的多重PCR組合物，所述多重PCR組合物包括：

第一組：檢測MTHFR?C677T位點的寡核苷酸：如SEQ?ID?NO:1所示的上游引物、如SEQ?IDNO:2所示的下游引物，以及如SEQ?ID?NO:3和4所示的探針，和檢測MTRR?A66G位點的寡核苷酸：如SEQ?ID?NO:5所示的上游引物、如SEQ?ID?NO:6所示的下游引物，以及如SEQ?ID?NO:7和8所示的探針；

第二組：檢測MTHFR?A1298C位點的寡核苷酸：如SEQ?ID?NO:9所示的上游引物、如SEQID?NO:10所示的上游引物，以及如SEQ?ID?NO:11所示的下游引物，和檢測SLC19A1?A80G位點的寡核苷酸：如SEQ?ID?NO:12所示的上游引物、如SEQ?ID?NO:13所示的上游引物，以及如SEQ?ID?NO:14所示的下游引物；

其中，第一組與第二組內分別檢測兩種位點的4種SNP類型所采用的熒光報告基團互不相同且互不干涉。

2.根據權利要求1所述的多重PCR組合物，其中，所述熒光報告基團互不干涉地選自FAM、HEX、ROX、VIC、CY5、5～TAMRA、TET、CY3和JOE。

3.權利要求1或2所述的多重PCR組合物在制備檢測葉酸代謝能力的試劑盒中的用途。

4.一種用于檢測葉酸代謝能力的試劑盒，所述試劑盒包括如權利要求1或2所述的多重PCR組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其中，所述試劑盒還包括核酸釋放試劑、dNTP、DNA聚合酶，和PCR緩沖液中的至少一種。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中，所述dNTP為2～3mmol/L、PCR緩沖液為3～7μL、DNA聚合酶為5U/μL～15U/μL。

7.根據權利要求5或6所述的試劑盒，其中，所述核酸釋放試劑包括0.01～0.5mmol/L的莎梵婷、100～200mmol/L的氯化鉀、50～200mmol/L的氯化鋰、質量/體積比為0.1％～1％的十二烷基硫酸三乙醇胺、體積/體積比為0.1％～1％的乙基苯基聚乙二醇、質量/體積比為0.01％～2％的十二烷基磺酸鈉和體積/體積比為0.05％～1％的乙醇。

8.一種用于制備檢測葉酸代謝能力的多重PCR組合物的用途，所述檢測包括以下步驟：

1)釋放待測樣本的核酸；

2)使用如權利要求1或2所述的多重PCR組合物或權利要求4～6中任一項所述的試劑盒對步驟1)獲得的核酸進行熒光定量PCR；

3)獲得并分析結果。

9.根據權利要求8所述的用途，所述樣本為全血或者口腔拭子。

10.根據權利要求9所述的用途，所述第一組寡核苷酸適用于熒光探針法，所述第二組寡核苷酸適用于熔解曲線法。

11.根據權利要求10所述的用途，通過判斷擴增曲線和CT值來分析結果。

12.根據權利要求9～11任一項所述的用途，其中，所述熒光定量PCR的反應條件為：