[發明專利]一種提高鏈霉菌雷帕霉素產量的方法

有效

• 申請號: 202010084526.8
• 申請日: 2020-02-10
• 公開（公告）號: CN113249401B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 姜衛紅;田進忠;孫新強;蘆銀華
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子植物科學卓越創新中心
• 主分類號: C12N15/76
• 分類號: C12N15/76;C12N15/74;C12N15/90;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/61;C12N1/21;C12P17/18
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種生產雷帕霉素的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1) 下調雷帕霉素生產菌中目標基因表達；其中，所述目標基因是選自下組的基因或其組合：三羧酸循環途徑基因gltA、脂肪酸合成途徑基因fabH，芳香族氨基酸合成途徑基因cm；所述的下調雷帕霉素生產菌中目標基因表達包括：敲除或沉默所述目標基因，利用雷帕霉素生產菌的群感效應體系進行表達，以srbA基因的啟動子驅動Cas酶與sgRNA的表達，該啟動子能感應雷帕霉素生產菌的生長，在生長轉換期啟動表達；

(2) 培養(1)的雷帕霉素生產菌，生產雷帕霉素。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述三羧酸循環途徑基因gltA是選自下組的基因或其組合：gltA1、gltA2、gltA3；或，所述脂肪酸合成途徑基因fabH是選自下組的基因或其組合：fabH1、fabH2、fabH3；或，所述芳香族氨基酸合成途徑基因cm是選自下組的基因或其組合：cm1、cm2、cm3、cm4。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述目標基因的組合為下組的組合：fabH3、gltA2和cm2的組合。

4.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的下調雷帕霉素生產菌中目標基因表達包括：通過基因編輯敲除所述目標基因，其中：

靶向于所述gltA1基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 1；

靶向于所述gltA2基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2，SEQ ID NO: 11，SEQ IDNO: 12或SEQ ID NO: 13；

靶向于所述gltA3基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 3；

靶向于所述fabH1基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 4；

靶向于所述fabH2基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 5；

靶向于所述fabH3基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 6，SEQ ID NO: 14，SEQ IDNO: 15或SEQ ID NO: 16；

靶向于所述cm1基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 7；

靶向于所述cm2基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 8，SEQ ID NO: 17或SEQ IDNO: 18；

靶向于所述cm3基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 9；

靶向于所述cm4基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO: 10。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，沉默所述目標基因利用特異性干擾所述目標基因的表達的干擾分子；所述的干擾分子是以所述目標基因或其轉錄本為抑制或沉默靶標的dsRNA、反義核酸、小干擾RNA、微小RNA，或能表達或形成所述dsRNA、反義核酸、小干擾RNA、微小RNA的構建物。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雷帕霉素生產菌是選自下組的菌：雷帕鏈霉菌，游動放線菌或伊氏鏈霉菌。

7.目標基因的用途，用于作為提高雷帕霉素生產菌的雷帕霉素產量的靶標，制備提高雷帕霉素產量的下調劑；其中，所述目標基因是選自下組的基因或其組合：三羧酸循環途徑基因gltA、脂肪酸合成途徑基因fabH，芳香族氨基酸合成途徑基因cm；所述提高雷帕霉素產量的下調劑敲除或沉默所述目標基因，利用雷帕霉素生產菌的群感效應體系進行表達，以srbA基因的啟動子驅動Cas酶與sgRNA的表達，該啟動子能感應雷帕霉素生產菌的生長，在生長轉換期啟動表達。