[發明專利]一種微生物發酵菌劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010083497.3
• 申請日: 2020-02-09
• 公開（公告）號: CN111154694A
• 公開（公告）日: 2020-05-15
• 發明（設計）人: 邱忠平;何偲;陳帝霖;黃元霞;李明星;陳文靜;鄒美慧
• 申請（專利權）人: 西南交通大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/18;A23L33/00;A23L29/00;A23L19/20;C12R1/245;C12R1/24;C12R1/01;C12R1/865;C12R1/125
• 代理公司: 成都華飛知識產權代理事務所(普通合伙) 51281
• 代理人: 杜群芳

1.一種微生物發酵菌劑，其特征在于，包括干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)、哈伯氏乳桿菌(Lactobacillus harbinensis)和屎腸球菌(Enterococcus faecium)。

2.根據權利要求1所述的一種微生物發酵菌劑，所述微生物發酵菌劑中各活菌的總活菌數為2.4×10⁹CFU/mL以上。

3.根據權利要求1所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，還包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

4.根據權利要求3所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，所述微生物發酵菌劑的總活菌數為2.8×10⁹CFU/mL以上。

5.根據權利要求3所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，還包括枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。

6.根據權利要求5所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，所述微生物發酵菌劑的總活菌數為3.8×10⁹CFU/mL以上。

7.根據權利要求5所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，

所述干酪乳桿菌為干酪乳桿菌QH16，干酪乳桿菌QH16的16SrDNA在Genbank的登陸號為MN809276，

所述哈伯氏乳桿菌為哈伯氏乳桿菌QH21，哈伯氏乳桿菌QH21的16SrDNA在Genbank的登陸號為MN809279，

所述屎腸球菌為屎腸球菌QH19，屎腸球菌QH19的16SrDNA在Genbank的登陸號為MN809277，

所述釀酒酵母包括釀酒酵母QH1、釀酒酵母QH2和釀酒酵母QH8，釀酒酵母QH1的18SrDNA在Genbank的登陸號為MN759772，釀酒酵母QH2的18SrDNA在Genbank的登陸號為MN759439，釀酒酵母QH8的18SrDNA在Genbank的登陸號為918288，

所述枯草芽孢桿菌包括枯草芽孢桿菌QH10和枯草芽孢桿菌QH12，枯草芽孢桿菌QH10的16SrDNA在Genbank的登陸號為MN809144，枯草芽孢桿菌QH12的16SrDNA在Genbank的登陸號為MN809275。

8.根據權利要求7所述的一種微生物發酵菌劑，其特征在于，所述菌劑中，干酪乳桿菌QH16、哈伯氏乳桿菌QH21、屎腸球菌QH19、釀酒酵母QH1、釀酒酵母QH2、釀酒酵母QH8、枯草芽孢桿菌QH10和枯草芽孢桿菌QH12的活菌數比為1.0～2.5：1.0～2.5：2.0～3.0：2.0～2.5：3.0～3.5：3.0～3.5：1.5～2.0：2.0～2.5。

9.根據權利要求1～8任意一項所述微生物發酵菌劑的應用方法，其特征在于，用于果蔬發酵。

10.一種微生物發酵菌劑的制備方法，其特征在于，以葡萄酵素、哈密瓜酵素、桑葚酵素、獼猴桃酵素、酸奶和益生菌劑中的至少一種為原料，通過包括以下步驟的方法制得：

步驟S1，分別取各原料酵素置于MRS液體培養基中進行恒溫培養，得到富集培養液；

步驟S2，對富集培養液進行分離純化，采用梯度稀釋法從培養液中分離得到純菌種；

步驟S3，分別對各個分離得到的純菌種進行耐酸性篩選和耐膽鹽篩選，

所述耐酸性篩選具體為，將活化兩代的純菌種按1％的接種量分別接種于pH為3.5的MRS液體培養基、pH為6.5的MRS液體培養基、pH為3.5的YPD液體培養基、以及pH為6.5的YPD液體培養基中，在溫度為35℃恒溫搖床中培養24h后，測定其在600nm下的吸光值，將同類型培養基中兩個吸光值的比值作為菌種在pH為3.5下的存活率，篩選出基于MRS液體培養基存活率大于50％的菌種，以及基于YPD液體培養基存活率大于80％的菌種；

所述耐膽鹽篩選具體為，將活化兩代后的純菌種按1％的接種量分別接種于膽鹽濃度為0.3％的MRS液體培養基、無膽鹽的MRS液體培養基、膽鹽濃度為0.3％的YPD液體培養基、以及無膽鹽的的YPD液體培養基中，在溫度為35℃恒溫搖床中培養24h后，測定其在600nm下的吸光值，將同類型培養基中兩個吸光值的比值作為菌種在0.3％膽鹽濃度下的存活率，篩選出基于MRS液體培養基存活率大于20％的菌種，以及基于YPD液體培養基存活率大于45％的菌種；

步驟S4.將同時滿足耐酸性篩選和耐膽鹽篩選菌種進行復合，得到微生物發酵菌劑。