[發(fā)明專(zhuān)利]用于鑒定羅布麻綠肖葉甲的核苷酸序列及鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010082220.9
• 申請(qǐng)日: 2020-02-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111172291B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁明龍;馮潤(rùn)秋;段廷玉;李春杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘭州大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京興智翔達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11768
• 代理人: 郭衛(wèi)芹

1.羅布麻綠肖葉甲線(xiàn)粒體CO1基因組序列在鑒定羅布麻綠肖葉甲中的應(yīng)用；所述核苷酸序列為序列表中SEQ ID No.1。

2.羅布麻綠肖葉甲的鑒定方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)提取待測(cè)昆蟲(chóng)的總DNA；

(2)利用節(jié)肢動(dòng)物通用條形碼線(xiàn)粒體COI基因引物對(duì)步驟(1)得到的總DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序；

(3)對(duì)步驟(2)獲得的核苷酸序列進(jìn)行比對(duì)，進(jìn)行物種鑒別：如果獲得的其他序列與序列表中SEQ ID No.1比對(duì)后的相似性小于99％，則證明不是羅布麻綠肖葉甲，如果相似性高于99％，則就是羅布麻綠肖葉甲。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于：步驟(1)中，所述待測(cè)昆蟲(chóng)為幼蟲(chóng)或成蟲(chóng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于：步驟(2)中，所述節(jié)肢動(dòng)物通用條形碼線(xiàn)粒體COI基因引物為：

LCO1490：GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG

HCO2198：TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于：步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)體系為25μL，其中模板DNA為2μL，Mix酶12.5μL，正反向引物各1.5μL，加7.5μL去離子水調(diào)至終體積25μL。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鑒定方法，其特征在于：步驟(2)中，所述PCR擴(kuò)增時(shí)的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3分鐘，94℃變性20秒，48℃復(fù)性30秒，72℃延伸1分鐘，35個(gè)循環(huán)后，72℃再延伸10分鐘。