[發(fā)明專利]一種快速檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法

有效

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• 申請日: 2020-02-07
• 公開（公告）號: CN111189941B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發(fā)明（設計）人: 張迎;俞安敏;馮穎;劉平年;陳志強
• 申請（專利權）人: 通標標準技術服務（上海）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 上海科政專利代理事務所(普通合伙) 31463
• 代理人: 楊軍

本發(fā)明涉及一種快速檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法，包括以下步驟：1)樣品預處理：樣品用粉碎機粉碎后過2.0mm篩，混合均勻裝入自封袋中，密封備用；2)樣品的提取：取樣品，用氨水和乙腈提取；3)樣品的凈化：將提取液過FaPEx凈化柱后，用氨水?乙腈溶液稀釋混勻；4)基質校準溶液制備：稱取不含苦參堿的陰性茶葉樣品，按照上述步驟制備陰性樣品提取液，用于配制苦參堿基質標準溶液；5)采用液相色譜?串聯(lián)質譜法測定樣品溶液中苦參堿的濃度；6)根據(jù)樣品溶液中苦參堿的濃度，計算樣品中苦參堿的殘留量；本發(fā)明測定方法快速、簡單，能夠實現(xiàn)茶葉中苦參堿含量的準確測定，解決了茶葉中苦參堿殘留量檢測方法操作繁復冗長的問題。

[技術領域]

本發(fā)明屬于分析化學技術領域，具體地說是一種快速檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法。

[背景技術]

隨著使用傳統(tǒng)化學藥物的弊端日益凸顯，在農業(yè)生產中尋求相對安全、高效低毒的替代品成為必然趨勢。與化學藥物相比，生物農藥通常被認為無公害、無污染、無殘留，不易產生抗性，因而被認為是化學藥物理想的替代品，生物農藥的發(fā)展方興未艾。但生物農藥也存在毒副作用。

苦參堿是一種高效廣譜植物源殺蟲劑，對2～3齡茶毛蟲具有速效性和持久性，對茶尺蠖2齡幼蟲和茶假眼小綠葉蟬低齡若蟲有顯著的毒殺作用。苦參堿屬低毒植物源農藥，對人體傷害較小，因此在我國無公害生態(tài)茶園、有機茶園大面積推廣使用。但生物農藥也存在毒副作用，研究表明高劑量的苦參堿對小鼠生殖細胞有損傷作用，能誘發(fā)精子畸變。苦參堿在茶葉中的濫用導致食品安全隱患，茶葉中苦參堿殘留風險評估以及最大殘留限量值(MRL)的制定勢在必行。雖然在現(xiàn)行的GB 2763《食品中農藥最大殘留限量》中僅對一些蔬菜、水果基質給出了苦參堿殘留限量要求，尚未涉及茶葉，但國外對苦參堿的限量要求和含量檢測也越來越重視。歐盟法規(guī)已對茶葉中苦參堿的殘留限量做出明確要求，限量為0.01mg/kg。

苦參堿屬于堿性水溶性化合物，具有比較強的堿性，在水中有良好的溶解性，溶于冷水、乙醇、乙醚、氯仿和苯，難溶于石油醚。作為生物堿，其堿性強弱，不但與雜環(huán)結構中N原子結合狀態(tài)有關，也與N原子所處的化學環(huán)境有關，常規(guī)的茶葉中農殘檢測方法顯然不適用。對于茶葉中苦參堿殘留量的檢測，目前沒有標準方法可循。雖有少量文獻報道了茶葉中苦參堿殘留量的質譜檢測方法，但由于茶葉基質的復雜性及苦參堿本身性質的特殊性，報道中采用了繁復的前處理步驟以降低茶葉基質對苦參堿提取效率的影響來保持苦參堿在提取過程中的穩(wěn)定性。該方法檢測步驟冗長，增加了測定結果不確定性，也為實驗室對大批量茶葉進行苦參堿殘留量檢測帶來了困難。因此，如何建立一個快速準確檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法迫在眉睫。

[發(fā)明內容]

本發(fā)明的目的就是要解決上述的不足而提供一種快速檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法，不僅測定方法快速、簡單，而且能夠實現(xiàn)茶葉中苦參堿含量的準確測定，解決了茶葉中苦參堿殘留量檢測方法操作繁復冗長的問題。

為實現(xiàn)上述目的設計一種快速檢測茶葉中苦參堿殘留量的方法，包括以下步驟：1)樣品預處理：將茶葉樣品用粉碎機粉碎后過2.0mm篩，混合均勻，裝入潔凈干燥的自封袋中，密封備用；2)樣品的提取：稱取樣品，用氨水和乙腈提取；3)樣品的凈化：將步驟2)所得的提取液過FaPEx-TEA凈化柱后，采用氨水-乙腈溶液稀釋，混勻；4)基質標準溶液制備：稱取不含苦參堿的陰性樣品，根據(jù)步驟1)至步驟3)制備陰性樣品提取液，用于配制苦參堿基質標準溶液；5)采用液相色譜-串聯(lián)質譜儀測定樣品溶液中苦參堿的濃度；6)根據(jù)步驟5)所得的樣品溶液中苦參堿的濃度，經由步驟4)得到的基質標準溶液校正，即可計算樣品中苦參堿的殘留量。

進一步地，步驟2)中，稱取均勻試樣0.5g，置于50mL離心管中，加入2mL氨水，渦旋均勻，靜置10min，再加入18mL乙腈，渦旋均勻，然后以6000r/min離心8min，取上清液過0.45μm濾膜于50mL離心管中。

進一步地，步驟3)中，取2mL上清液分兩次通過FaPEx-TEA凈化柱，收集凈化液，取500μL凈化液，加入氨水-乙腈溶液稀釋定容到1mL，混勻后供液相色譜-串聯(lián)質譜儀分析。