[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)非洲豬瘟病毒DNA的組合物及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010081958.3
• 申請(qǐng)日: 2020-02-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111254220A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖東升;趙偉;鞠青;邱坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都導(dǎo)勝生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都中絡(luò)智合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51300
• 代理人: 喻依豐

本申請(qǐng)公開(kāi)了一種用于檢測(cè)非洲豬瘟病毒DNA的組合物，可以包括一組或者多組引物對(duì)和探針具體如下所示：其中一組由引物對(duì)引物?F：SEQ ID NO：1，引物?R：SEQ ID NO：2和探針：SEQ ID NO：9組成；本發(fā)明還提供一種試劑盒，包括上述組合物和用于PCR的體系，本發(fā)明能夠針對(duì)非洲豬瘟檢測(cè)體現(xiàn)極高的特異性和靈敏度，對(duì)于精準(zhǔn)檢測(cè)非洲豬瘟病毒的存在具有效率高，準(zhǔn)確性高，抗干擾能力強(qiáng)，對(duì)實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)疫情檢測(cè)和控制具有突出作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本生物制劑或組合物、試劑盒領(lǐng)域，尤其涉及采用TaqMan法進(jìn)行基因檢測(cè)所需的組合物和試劑盒，具體涉及一種用于檢測(cè)非洲豬瘟病毒DNA的組合物及試劑盒。

背景技術(shù)

非洲豬瘟(African Swine fever，East African Swine fever,ASF)，是一種急性，發(fā)熱傳染性很高的濾過(guò)性病毒所引起的豬病，其特征是發(fā)病過(guò)程短，但死亡率高達(dá)100％，病豬臨床表現(xiàn)為發(fā)熱，皮膚發(fā)紺，淋巴結(jié)，腎，胃腸粘膜明顯出血。本病自1909年在肯尼亞首次報(bào)道，一直存在于撒哈拉以南的非洲國(guó)家，1957年先后流傳至西歐和拉美國(guó)家，多數(shù)被及時(shí)撲滅，但在葡萄牙，西班牙西南部和意大利的撒丁島仍有流行。2007年以來(lái)，非洲豬瘟在全球多個(gè)國(guó)家發(fā)生、擴(kuò)散、流行，特別是俄羅斯及其周邊地區(qū)。

2018年8月，中國(guó)在遼寧沈陽(yáng)、河南鄭州、江蘇連云港3個(gè)相隔很遠(yuǎn)的地區(qū)，接連發(fā)現(xiàn)多起非洲豬瘟疫情。11月23日，北京市房山區(qū)排查出非洲豬瘟疫情。2019年中國(guó)內(nèi)陸地區(qū)，包括以重慶、四川為主的西南地區(qū)均大面積發(fā)現(xiàn)諸多病癥，雖經(jīng)疫情控制部門及時(shí)的進(jìn)行消殺掩埋，但依然造成數(shù)量巨大的患病群體，并快速蔓延。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：通過(guò)采用本申請(qǐng)?zhí)峁┑脑噭┖心軌蚓珳?zhǔn)的判別被檢測(cè)樣品是否含有非洲豬瘟病毒，以為后續(xù)的疫情處置提供準(zhǔn)確的、科學(xué)的判定依據(jù)，避免檢測(cè)手段的誤差導(dǎo)致可疑攜帶體被掩埋導(dǎo)致財(cái)產(chǎn)損失；亦可避免帶病體出現(xiàn)漏檢的可能。本申請(qǐng)人的研發(fā)團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)反復(fù)研究和實(shí)驗(yàn)，旨在解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，避免出現(xiàn)陽(yáng)性、弱陽(yáng)、陰性的檢測(cè)結(jié)果，由于非洲豬瘟的疫情傳播迅速，需要及時(shí)的進(jìn)行判斷和隔離，現(xiàn)有技術(shù)中出現(xiàn)的弱陽(yáng)狀態(tài)則需要二次復(fù)檢，以進(jìn)一步確定攜帶體是否已經(jīng)染病，那么在初檢定論至復(fù)檢結(jié)果過(guò)程中需要一定的處理時(shí)間周期，那么在該周期期間，可能發(fā)生疫情的進(jìn)一步傳播，不能實(shí)現(xiàn)即時(shí)的隔離問(wèn)題。本申請(qǐng)人研發(fā)團(tuán)隊(duì)經(jīng)過(guò)反復(fù)提取實(shí)驗(yàn)，通過(guò)分析非洲豬瘟的全基因組序列研發(fā)出一種精準(zhǔn)檢測(cè)的引物對(duì)和探針，通過(guò)本發(fā)明提供的組合物及試劑盒采用現(xiàn)有PCR擴(kuò)增方式進(jìn)行精準(zhǔn)判斷，以此完成本發(fā)明，并達(dá)到預(yù)期技術(shù)效果。

為了達(dá)到上述目的，本申請(qǐng)所采用的技術(shù)方案為：

一種用于檢測(cè)非洲豬瘟病毒DNA的組合物，可以包括以下四組引物對(duì)和探針中的A組或B組或者C組或者D組，也可以包括A組在內(nèi)的多組組合，也可以包括ABCD組。所述ABCD四組對(duì)應(yīng)的引物對(duì)和探針具體如下所示：

所述A組由引物對(duì)引物-F：SEQ ID NO：1，引物-R：SEQ ID NO：2和探針：SEQ ID NO：9組成；

另一組B由引物對(duì)引物-F：SEQ ID NO：3，引物-R：SEQ ID NO：4和探針：SEQ ID NO：10組成；還包括

另一組C由引物對(duì)引物-F：SEQ ID NO：5，引物-R：SEQ ID NO：6和探針：SEQ ID NO：11組成；還包括

另一組D由引物對(duì)引物-F：SEQ ID NO：7，引物-R：SEQ ID NO：8和探針：SEQ ID NO：12組成。

所述探針A、探針B和探針C均包含熒光分子5’端的熒光基團(tuán)和3’端的淬滅基團(tuán)，所述5’端采用FAM、HEX、CY3、CY5、VIC、ROX、JOE中任一一種，所述3’端對(duì)應(yīng)的采用BHQ1、BHQ2、Dabcyl、TAMRA、eclipse中任一一種。