[發明專利]用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010081488.0
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN111088405A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 朱琦
• 申請（專利權）人: 蘇州行知康眾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州謹和知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 葉棟

本發明涉及一種用于檢測新型冠狀病毒2019?nCoV的引物探針組合物、試劑盒及方法，其通過設計組合物一和組合物二作為引物探針組合物，以數字PCR技術為基礎，針對病毒多個靶向基因設計特異性引物探針，數字PCR檢測可直接統計PCR終點陽性微反應體系個數，利用泊松統計直接計算目標分子的絕對拷貝數，可實現單個目標分子的檢測，做到絕對計數定量檢測病毒含量，此外，整個檢測時長不超過3h，省時高效且靈敏度高。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測新型冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物、試劑盒及方法，屬于體外診斷檢測領域。

背景技術

新型冠狀病毒，也稱2019-nCoV，是一種可導致呼吸系統疾病的病毒。此病毒可引起炎癥及肺部氣道內粘液和體液積聚(肺炎)。冠狀病毒有多種類型，大多數類型僅感染動物，但有時會發生變異并感染人類。

新型冠狀病毒可引起呼吸系統疾病并導致肺炎，肺炎癥狀包括：發熱,咳嗽，呼吸困難等。該病毒感染途徑包括：吸入感染者咳嗽或打噴嚏時噴出的飛沫；觸摸被病毒污染的物品，如桌子或門把手，之后再觸摸口、鼻或眼睛；接近攜帶病毒的動物或食用未經烹飪或未煮熟的含有病毒的肉類或動物制品等。

就目前新型冠狀病毒感染狀況而言，健康者預防工作是重中之重，但對病毒感染者快速有效的檢測更應是首當其沖。現階段市場推出的新型冠狀病毒檢測試劑盒多為以熒光定量qPCR技術為基礎的檢測試劑盒，最快檢測結果輸出時長4h，且只是定性判斷無法絕對定量，靈敏度較差。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于檢測新型冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物、試劑盒及方法，能實現單個目標分子的檢測，做到絕對計數定量檢測病毒含量，此外，整個檢測時長不超過3h，省時高效。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：一種用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，包括組合一和組合二所示的引物探針組合物：

組合一

含有如SEQ ID NO.1所示序列的上游引物：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA(SEQ IDNO.1)；

含有如SEQ ID NO.2所示序列的下游引物：ACGATTGTGCATCAGCTGA(SEQ ID NO.2)；

含有如SEQ ID NO.3所示序列的探針：GGCTGTAGTTGTGATCAACTCCGC(SEQ IDNO.3)；

組合二

含有如SEQ ID NO.4所示序列的上游引物：GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT(SEQ IDNO.4)；

含有如SEQ ID NO.5所示序列的下游引物：CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG(SEQ IDNO.5)；

含有如SEQ ID NO.6所示序列的探針：GGCAATGGCGGTGATGCTGCTC(SEQ ID NO.6)；

所述組合一和組合二還包括熒光基因和熒光淬滅基因。

進一步地，所述熒光基因選自VIC、FAM、HEX、Cy5、Rox或TET中的至少一種。

進一步地，所述熒光淬滅基因選自BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、BBQ或TAMRA中的至少一種。

進一步地，所述探針的5’端標記有所述熒光基因，所述探針的3’端標記有所述熒光淬滅基因。

本發明還提供一種用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其包括所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物。