[發明專利]用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物、試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010081488.0
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN111088405A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 朱琦
• 申請（專利權）人: 蘇州行知康眾生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州謹和知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32295
• 代理人: 葉棟

1.一種用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于，包括組合一和組合二所示的引物探針組合物：

組合一

含有如SEQ ID NO.1所示序列的上游引物：CCCTGTGGGTTTTACACTTAA(SEQ ID NO.1)；

含有如SEQ ID NO.2所示序列的下游引物：ACGATTGTGCATCAGCTGA(SEQ ID NO.2)；

含有如SEQ ID NO.3所示序列的探針：

GGCTGTAGTTGTGATCAACTCCGC(SEQ ID NO.3)；

組合二

含有如SEQ ID NO.4所示序列的上游引物：

GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT(SEQ ID NO.4)；

含有如SEQ ID NO.5所示序列的下游引物：

CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG(SEQ ID NO.5)；

含有如SEQ ID NO.6所示序列的探針：GGCAATGGCGGTGATGCTGCTC(SEQ ID NO.6)；

所述組合一和組合二還包括熒光基因和熒光淬滅基因。

2.如權利要求1所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于，所述熒光基因選自VIC、FAM、HEX、Cy5、Rox或TET中的至少一種。

3.如權利要求1所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于，所述熒光淬滅基因選自BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3、BBQ或TAMRA中的至少一種。

4.如權利要求1所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物，其特征在于，所述探針的5’端標記有所述熒光基因，所述探針的3’端標記有所述熒光淬滅基因。

5.一種用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1至4中任一項所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的引物探針組合物。

6.如權利要求5所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其特征在于，還包括反應混合液，所述反應混合液包括緩沖液、MgCl₂、dNTPs和酶。

7.如權利要求6所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其特征在于，所述酶包括DNA聚合酶和逆轉錄酶。

8.如權利要求7所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其特征在于，所述反應混合液包括混合液一和混合液二，所述混合液一包括2×緩沖液、MgCl₂、dNTPs和DNA聚合酶；所述混合液二包括1×緩沖液、逆轉錄酶h和甘油。

9.如權利要求5所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒，其特征在于，還包括陰性對照品和/或陽性對照品，所述陰性對照品為空載質?；旌衔?，所述陽性對照品為冠狀病毒2019-nCoV核酸質粒混合物。

10.一種冠狀病毒2019-nCoV的核酸檢測方法，其特征在于，采用如權利要求5至9中任一項所述的用于檢測冠狀病毒2019-nCoV的試劑盒來提取待檢測樣本DNA，通過數字PCR對靶向基因擴增片段進行絕對定量。