[發(fā)明專利]一種快速檢測人腺病毒的RDA方法及試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010081196.7
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN112301156B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 季宇;劉華勇;謝嬋芳;陳翀
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州普世君安生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開一種快速檢測人腺病毒的RDA方法及試劑盒，包括特異性引物對以及RDA熒光標(biāo)記探針，以實現(xiàn)對人腺病毒（HAdV）進(jìn)行安全、特異、靈敏、簡便的檢測，從而彌補現(xiàn)有傳統(tǒng)檢測技術(shù)的不足。此方法提供的試劑盒可省去核酸提取步驟，并在37～42℃恒溫條件下、20min內(nèi)實現(xiàn)人腺病毒的檢測，特異性為100％，非常適用于現(xiàn)場快速檢測。與普通PCR方法相比，RDA熒光法是在恒溫下反應(yīng)，不需變溫，不需復(fù)雜儀器，而且反應(yīng)時間短。因此，本發(fā)明的方法及其試劑盒具有操作簡單、快速、特異性好、靈敏度高、成本低廉等特點，為人腺病毒的現(xiàn)場快速檢測篩查提供有效的技術(shù)手段，具有廣闊的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種基于RDA熒光法檢測技術(shù)檢測人腺病毒核酸的引物對、探針及相關(guān)試劑盒。

背景技術(shù)

人腺病毒(Human?Adenovirus，HAdV)是一類主要感染人類呼吸道、消化道、泌尿生殖道的病原體,在自然界分布廣泛,型別眾多。腺病毒屬于腺病毒科?(Adenoviridae)的哺乳動物腺病毒屬(Mastadenovirus)，為DNA病毒，共分為A-G?7個亞組，目前已經(jīng)鑒定的有67個不同的型別。通過飛沫空氣傳播是腺病毒主要的傳播途徑，另外可通過糞口傳播和接觸傳播。有三分之一的腺病毒與人類疾病相關(guān)，主要感染人類呼吸道和消化道，其中1、2、3、4、6、7、8、11、14、21、37、40和41型腺病毒等容易引起急性呼吸道疾病、流行性眼角膜結(jié)膜炎(紅眼病)、急性咽結(jié)膜炎、嬰幼兒致死性肺炎、胃腸炎等。人腺病毒可造成區(qū)域性流行或暴發(fā)流行，但由于其感染的臨床表現(xiàn)通常無特異性，目前尚無特異性治療方法，一旦發(fā)展為重癥肺炎，則致死率較高。其中3型和7型傳染性強，在人群聚集地一旦發(fā)生易引起群體性感染和爆發(fā)流行，是引起兒童呼吸道腺病毒感染最常見的型別。人腺病毒引起的疾病如急性呼吸道疾病、小兒腹瀉和咽結(jié)合膜熱等，在流行早期，傳染性強，流行強度大，傳播范圍廣，同時由于廣大群眾對該病認(rèn)識不足，防護(hù)意識較差，患者出現(xiàn)問題往往會選擇基層社區(qū)診療機構(gòu)進(jìn)行治療，由于現(xiàn)存腺病毒檢測方法的不足，往往導(dǎo)致診斷的不及時和常規(guī)抗生素的濫用。

傳統(tǒng)的腺病毒核酸檢測方法大多基于PCR，檢測時需要依賴PCR儀或昂貴的實時定量PCR儀，需要多個操作過程，包括病毒的裂解，病毒DNA提取和分子檢測，整個過程通常集中在實驗室的內(nèi)進(jìn)行，需要精密的儀器和熟練的操作人員。然而這些條件在基層社區(qū)診療機構(gòu)往往難以獲得，嚴(yán)重影響了腺病毒的早期發(fā)現(xiàn)和預(yù)防。目前仍然缺乏適合基層檢驗的簡單便宜自動化程度高的腺病毒檢測試劑盒。

隨著體外核酸恒溫擴增的悄然興起，傳統(tǒng)擴增技術(shù)的局限性有所改變，在過去的十年中，使核酸體外擴增變得更加簡單和方便的一些等溫核酸擴增技術(shù)已得到快速發(fā)展，如LAMP（環(huán)介導(dǎo)核酸擴增技術(shù)）、HDA（解旋酶依賴等溫核酸擴增技術(shù)）等均可在等溫條件下擴增病毒核酸。這些技術(shù)只需要溫度控制裝置來保持一個恒定反應(yīng)溫度，就可以實現(xiàn)高效的核酸擴增，從而得以擺脫對精密控制溫度變化的?PCR?儀的依賴。若能在常溫條件下實現(xiàn)核酸的擴增，將進(jìn)一步使核酸擴增技術(shù)簡單化，并有利于此類技術(shù)更廣范圍的應(yīng)用。及時準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)傳染病疫情對于疾病的防治和疫情的控制具有重要意義，因此研究和開發(fā)一種能在基層診療機構(gòu)使用，在常溫下快速檢測核酸的試劑盒非常有必要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有人腺病毒檢測技術(shù)的缺陷和不足。研究得到一種人腺病毒（HAdV）RDA熒光法檢測試劑盒，實現(xiàn)人腺病毒的快速檢測，在檢測HAdV的整個過程中，從樣本處理到結(jié)果完成，僅需20-30min，大大縮短了常規(guī)的檢測時間，提高檢測效率。

本發(fā)明目的在于，提供優(yōu)選后的檢測人腺病毒的探針及引物對。

所述探針核苷酸序列如SEQ?ID?NO?.1或SEQ?ID?NO?.2所示。