[發明專利]一種快速檢測人腺病毒的RDA方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202010081196.7
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN112301156B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 季宇;劉華勇;謝嬋芳;陳翀
• 申請（專利權）人: 廣州普世君安生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
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• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測人腺病毒的RDA試劑盒，其特征在于，所述RDA試劑盒包括核酸提取試劑、恒溫擴增反應試劑、陽性對照、陰性對照；所述恒溫擴增反應試劑包括重組酶KX60-600ng/μL、KY蛋白16-192ng/μL、單鏈結合蛋白gp32100-1000ng/μL、鏈置換DNA聚合酶3-100ng/μL、核酸外切酶30～200U、肌酸激酶0.1-0.8mg/ml、磷酸肌酸25-75mM、Tris緩沖液20～100mM、PEG2.5％-10％、醋酸鉀或氯化鉀0-150mM、dATP1-5mM、dNTPs150-600nM、DTT1-12mM、熒光標記探針150nM-600nM、引物150-600nM；

所述熒光標記探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，且所述探針的5’端標記發光基團，3’端標記淬滅基團，第5位堿基用四氫呋喃殘基(THF)替代；所述引物的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示；靶標序列如SEQ?ID?NO.5所示；

所述重組酶KX的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7所示，所述KY蛋白的氨基酸序列如SEQ?IDNO.9所示。

2.如權利要求1所述的RDA試劑盒，其特征在于，所述的核酸提取試劑包括Buffer?A、BufferB，所述BufferA為樣本裂解液，含有Tris-HCL緩沖體系、NaOH、SDS、EDTA、異硫氰酸胍、Tween80、曲拉通；所述BufferB含有Tris緩沖體系、氯化鉀、氯化鎂；所述陽性對照為含有人腺病毒靶標基因的質粒，所述陰性對照為空載體pUC57質粒。

3.一種非疾病診斷目的的人腺病毒的檢測方法，其特征在于，包含以下步驟：

從權利要求2所述RDA試劑盒中取BufferA分別與陽性對照、陰性對照、待檢樣本震蕩混勻，室溫靜置10-15min；加入BufferB，震蕩混勻后在混合液中加入恒溫擴增反應試劑中，震蕩離心后采集熒光信號，反應溫度為25-42℃，反應時間大于15分鐘，根據擴增曲線值分析待測樣品。

4.如權利要求3所述的檢測方法，所述反應溫度為39℃，所述反應時間為30分鐘。