[發明專利]一種新型重組酶依賴型擴增方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202010081170.2
• 申請日: 2020-02-06
• 公開（公告）號: CN111154739B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 陳翀;劉華勇;季宇;謝嬋芳;文荻琛
• 申請（專利權）人: 廣州普世利華科技有限公司;廣州普世君安生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12Q1/6844;C12N15/70
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一種重組酶聚合酶擴增反應用重組酶組合，其特征在于，包括60-600ng/μl的重組蛋白KX，及其16-192ng/μl的輔助蛋白KY，以及100-1000ng/μl的gp32蛋白、3-100ng/μl的BSuDNA聚合酶、0.1-0.8mg/ml的肌酸激酶；

所述重組蛋白KX的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，和/或所述重組蛋白KX的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述輔助蛋白KY核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，和/或所述輔助蛋白KY氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

其中，所述重組酶KX替代重組酶UvsX或RecA使用，KY蛋白替代UvsY蛋白使用。

2.一種重組酶依賴型擴增試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述重組酶組合。

3.根據權利要求2所述試劑盒，其特征在于，還包括如下試劑：(1)Tris-緩沖液，(2)醋酸鉀或醋酸鈉，(3)PEG20000或PEG35000，(4)二硫蘇糖醇，(5)dNTPs，(6)dATP，(7)磷酸肌酸，(8)引物，(9)醋酸鎂。

4.根據權利要求3所述試劑盒，其特征在于，所述引物的長度為18-30bp。

5.根據權利要求3所述試劑盒，其特征在于，所述Tris-緩沖液為Tris-tricine。

6.根據權利要求2-5任一所述試劑盒，其特征在于，包括如下配比的試劑：

(1)Tris-tricine，其pH 7.4-8.4，濃度為20～100mM；

(2)醋酸鉀或醋酸鈉，其濃度為0-150mM；

(3)PEG20000或PEG35000，其濃度為2.5％-10％；

(4)二硫蘇糖醇，其濃度為1-12mM；

(5)dNTPs，其濃度為150-600nM each；

(6)dATP，其濃度為1-5mM；

(7)肌酸激酶，其濃度為0.1-0.8mg/ml；

(8)磷酸肌酸，其濃度為25-75mM；

(9)BSu DNA聚合酶，其濃度為3-100ng/μl；

(10)gp32蛋白，其濃度為100-1000ng/μl；

(11)重組酶KX，其濃度為60-600ng/μl；

(12)KY蛋白，其濃度為16-192ng/μl；

(13)上游引物，其濃度為150nM-600nM；

(14)下游引物，其濃度為150nM-600nM；

(15)醋酸鎂，其濃度為10-30mM。

7.一種重組酶依賴型擴增反應方法，其特征在于，是以待檢樣本DNA或RNA為檢測模板，利用權利要求2-6任一所述試劑盒進行擴增反應。

8.根據權利要求7所述方法，其特征在于，反應條件為25-42℃反應10-60min。