[發(fā)明專利]基于硫化改性的CoOx

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010078362.8
• 申請日: 2020-02-05
• 公開（公告）號: CN111220608B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設計）人: 宋洪偉;牛湘衡;李欣;薛強勝
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于模擬酶、分析化學技術領域，涉及一種基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶活性比色檢測法，包括：分別于5 mL離心管中加入不同活度的堿性磷酸酶和1 mM HMPi，反應30～60 min；再向混合液中依次加入硫化改性的CoOx懸浮液、TMB、H₂O₂和醋酸鹽緩沖液，混勻體系后反應1～30 min；過膜后用紫外?可見吸收分光光度計記錄波長為652 nm處的吸光度；將上述TMBox的吸光度測量值與對應的ALP活度繪制校準后的ALP活度?吸光度標準工作曲線；將待測ALP樣品重復上述步驟，與標準工作曲線比對，即可獲得ALP活性。本發(fā)明檢測過程條件溫和，不需要其他試劑，實現(xiàn)了ALP活度的方便、快速檢測，檢測成本低廉，操作簡單，可檢測范圍寬至0.8～320 U/L，實現(xiàn)對人體血清中堿性磷酸酶活度的檢測。

技術領域

本發(fā)明屬于模擬酶、分析化學技術領域，涉及堿性磷酸酶的檢測方法，尤其涉及一種基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶活性比色檢測法。

背景技術

堿性磷酸酶(ALP)是一種生物酶，廣泛存在于許多人體組織和器官中。它具有催化許多磷酸化物質(例如核酸，蛋白質和小分子)水解的能力。通常，成人血液中ALP的活性范圍為40至190U/L。大量研究表明，ALP活性異常與多種疾病密切相關，包括骨損傷，肝功能障礙和前列腺癌。例如，ALP是早期成骨細胞分化過程中成骨細胞活性的重要指標，其活性通常隨骨活性的增加而增加。當其活性超過上限時，表示在此過程中可能發(fā)生活性骨沉積。另外，其他骨病，例如軟骨病，狼瘡炎和骨癌，也會導致ALP活性增加。此外，肝膽疾病患者經常發(fā)現(xiàn)ALP指標偏高，而嚴重的慢性腎炎，甲狀腺功能低下和貧血會導致ALP活性偏低。因此，它被普遍用作診斷和治療這些疾病的臨床生物標志物。此外，ALP經常用于各種酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)中。在這些需求下，開發(fā)有效，低成本且易于使用的ALP活性分析方法具有重要意義。

目前堿性磷酸酶活性的檢測方法主要有熒光法、電化學法、比色法等。例如：

中國專利CN110501318A，公開了一種檢測堿性磷酸酶活性的熒光方法,將對氨基苯磷酸作為底物,經堿性磷酸酶的催化水解生成對氨基苯酚,對氨基苯酚可以與后續(xù)加入的乙二胺發(fā)生反應,生成強熒光發(fā)射的聚合物碳點。體系中的堿性磷酸酶活性越高,生成的熒光聚合物碳點就越多,熒光就越強,根據(jù)檢測溶液的熒光強度變化,進行堿性磷酸酶活性的定量檢測。

中國專利CN110361440A，公開了一種堿性磷酸酶活性便攜式電泳滴定檢測方法及裝置, 通過在堿性磷酸酶催化-電泳滴定系統(tǒng)中進行電泳滴定堿性磷酸酶標準品,獲得不同活性堿性磷酸酶與對應的界面速度之間的標準曲線；然后在相同條件通過ALP-ET電泳滴定測定未知堿性磷酸酶活性的樣品界面速度,通過對比ALP-ET標準曲線獲得樣品中ALP活性。

中國專利CN107422014A，公開了發(fā)明提供了一種定量檢測堿性磷酸酶的方法,通過制備修飾電極,然后利用堿性磷酸酶催化其底物抗壞血酸磷酸酯脫去磷酸根生成具有強還原性的抗壞血酸,而抗壞血酸將反應液中的銀離子還原為銀單質并沉積電極表面上,最后利用修飾電極表面所沉積銀的溶出伏安信號來實現(xiàn)對堿性磷酸酶的高靈敏檢測。

中國專利CN106596532B，公開了一種簡單的堿性磷酸酶活性的檢測方法。利用樣本溶液中的堿性磷酸酶分析物在催化焦磷酸水解反應后,Cu²⁺因未被焦磷酸絡合而可高效率抑制糖化酶活性,使得水溶性較低的淀粉不被糖化酶水解。反應溶液中的淀粉被滴加到紙微流控分析裝置中后使得相應紙體發(fā)生從親水性轉變?yōu)槭杷缘臐櫇裥愿淖?進而使檢測試劑溶液可流過該區(qū)域的體積降低,最終導致其在紙裝置中的流動長度較短。紙裝置中檢測試劑溶液的流動長度反比于樣本中堿性磷酸酶的活性大小,即完成堿性磷酸酶活性的定量檢測。

上述已公開的堿性磷酸酶檢測方法雖然具有一定的檢測效率，但仍具有以下缺點和不足：

1)這些檢測方法操作相對復雜；

2)有些檢測方法對環(huán)境要求苛刻，成本相對較高，試劑保存條件要求高。