[發(fā)明專利]基于硫化改性的CoOx

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010078362.8
• 申請(qǐng)日: 2020-02-05
• 公開（公告）號(hào): CN111220608B
• 公開（公告）日: 2022-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋洪偉;牛湘衡;李欣;薛強(qiáng)勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于，包括如下步驟：

1）分別于5 mL離心管中加入不同活度的堿性磷酸酶和0.125 mL 1 mM 六偏磷酸鈉溶液，反應(yīng)30～60 min；所述堿性磷酸酶在體系內(nèi)的活度為0.8 U/L、2 U/L、4 U/L、8 U/L、16U/L、32 U/L、40 U/L、60 U/L、120 U/L、160 U/L、200 U/L、240 U/L、320 U/L；

2）再向混合液中依次加入0.05mL 1mg/mL的硫化改性的CoOx懸浮液、0.1 mL 5 mM的TMB、0.05mL 9.8M的H₂O₂和醋酸鹽緩沖液，確定溶液最終總體積為3 mL，混勻體系后反應(yīng)1～30 min，得到TMBox混合溶液；

3）將混合體系過膜后用紫外-可見吸收分光光度計(jì)測(cè)定TMBox混合溶液紫外吸收光譜，記錄波長為652 nm處的吸光度；

4）將上述TMBox的吸光度測(cè)量值與對(duì)應(yīng)的堿性磷酸酶活度繪制校準(zhǔn)后的堿性磷酸酶活度-吸光度標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；

5）將待測(cè)堿性磷酸酶樣品于5 mL離心管中和0.125 mL 1 mM 六偏磷酸鈉溶液，反應(yīng)30～60 min；再向混合液中依次加入0.05mL 1mg/mL的硫化改性的CoOx懸浮液、0.1 mL 5 mM的TMB、0.05mL 9.8M的H₂O₂和醋酸鹽緩沖液，確定溶液最終總體積為3 mL，混勻體系后反應(yīng)1～30 min，得到TMBox混合溶液；過膜后用紫外-可見吸收分光光度計(jì)測(cè)定紫外吸收光譜，記錄波長為652 nm處的吸光度，再與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線比對(duì)，即可獲得待測(cè)堿性磷酸酶活度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟1）中所述分別于5 mL離心管中加入不同活度的堿性磷酸酶和0.125 mL 1 mM 六偏磷酸鈉，反應(yīng)50 min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟2）中所述確定溶液最終總體積為3 mL，混勻體系后反應(yīng)5 min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟2）中所述醋酸鹽緩沖液pH為4，濃度0.2 M。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟5）中所述待測(cè)堿性磷酸酶樣品的可檢測(cè)活度范圍為0.8～320 U/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于硫化改性的CoOx的堿性磷酸酶比色檢測(cè)法，其特征在于：步驟5）中所述待測(cè)堿性磷酸酶樣品的檢測(cè)限低至0.38 U/L。