[發明專利]一種HA阻斷劑的制備方法、抗體檢測系統

在審

• 申請號: 202010077316.6
• 申請日: 2020-01-27
• 公開（公告）號: CN111393523A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 張杰;李永剛
• 申請（專利權）人: 江蘇帆博生物制品有限公司
• 主分類號: C07K16/02
• 分類號: C07K16/02;G01N33/68
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 趙奕

本發明屬于生物醫學技術領域，公開了一種HA阻斷劑的制備方法、抗體檢測系統，利用濃度為33％?50％的硫酸銨純化抗體；在得到的純化抗體中加入戊二醛交聯；透析完成后回收抗體并保存；將樣品、檢測微球、異嗜性抗體干擾指示微球和標記可檢測信號的第二抗體混合，形成一反應體系；檢測反應體系中第二抗體?抗原?第一抗體?微球四元復合物中微球上的可檢測信號，并與標準值或標準曲線比較，確定反應體系中目標抗原的存在與否和/或數量。本發明制備的HA阻斷劑抗干擾能力強，完全消除HA干擾，不會對免疫檢驗產生干擾，有效減少假陽性發生率，提高免疫檢驗的準確度及精準率；本發明的制備方法簡單，容易控制，成本低。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，尤其涉及一種HA阻斷劑的制備方法、抗體檢測系統。

背景技術

目前，最接近的現有技術：阻斷劑，也叫受體拮抗劑，指能與受體結合，并能阻止激動劑產生效應的一類配體物質。拮抗劑對相應受體有親和性，但沒有效能，從而抑制了激動劑對受體的作用。拮抗劑可以結合受體的活性位點，也可以結合別構位點，甚至單獨結合通常沒有生物調節作用的位點來達到效果。拮抗劑和受體結合性質不同，所以結合時間有長有短，結合的可逆性也有不同。拮抗劑分為競爭性拮抗劑和非競爭性拮抗劑等類型。大部分藥物拮抗劑都與內源性配體或底物競爭受體結合位點來達到效果。受體是可被配體結合而激活的大型蛋白質分子。受體可以結合在細胞膜上，也可存在于細胞內部，比如在細胞核或線粒體中。受體在活性位點與配體以非共價鍵結合，一個受體上可以有多個結合不同配體的位點。配體和受體在活性位點或別構位點結合后，都可以調節受體的活性。拮抗劑可以通過結合活性位點、別構位點，或者單獨結合通常不參與生物調節的位點來產生效果。血清中的易嗜性抗體(HA)已被證實導致免疫檢驗的假陽性或是假陰性干擾，在免疫檢測結合物中加入阻斷劑能夠消除HA的干擾。但是，在進行抗體檢測中，由于標本中HA的來源是未知的，不能夠準確的針對HA的結合位點進行操作，目前尚未有一個完全消除HA干擾的阻斷劑。

現有專利CN201811323185.4異嗜性抗體阻斷劑HBR-6及其制備方法，包括其可變區的氨基酸序列和核苷酸序列，其中，重鏈的3個互補決定區CDR序列分別為，CDR1：Phe-Thr-Ala-Asp-Thr-Ser-Ser，CDR2：Glu-Asp-Asp-Pro，CDR3：Val-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Ser-Tyr；輕鏈的3個互補決定區CDR序列分別為，CDR1：Asn-Ile-Pro-Lys-Leu-Leu-Ile-Tyr，CDR2：Ile-Val-Met-Thr，CDR3：Gln-Gly-Glu-Asp-Ile-Ala-Thr-Tyr-Arg，制備的異嗜性抗體阻斷劑親和性不好，抗干擾能力不強，不適用于大規模工業化生產。

現有專利CN201811323396.8異嗜性抗體阻斷劑HBT-1及其制備方法，包括其可變區的氨基酸序列和核苷酸序列，其中，重鏈的3個互補決定區CDR序列分別為，CDR1：Val-Gln-Ser-Ser-Ile-Thr，CDR2：Gln-Asp-Asp-Tyr-Ala-Tyr-Thr-Leu-Tyr，CDR3：Val-Tyr-Lys-Leu；輕鏈的3個互補決定區CDR序列分別為，CDR1：Gly-Asp-Val-Leu-Ser-Lys-Ser-Cys，CDR2：Lys-Asp-Arg-Phe，CDR3：His-Ile-Ile-Ser-Thr-Ser。制備的抗體親和性不佳，且工藝復雜，工藝參數難以精準控制。

綜上所述，現有技術存在的問題是：現有的HA阻斷劑親和性不高，無法實現完全消除HA干擾，會對免疫檢測結果產生影響；HA阻斷劑的制備工藝復雜，難以推廣使用。

解決上述技術問題的難度：目前市場上已經有商品化的HA阻斷劑如：IIR、NS-ABT、Heteroblock、MAB33及polyMAB33，其親和性較差，與HA結合實現減少干擾的效果并不顯著，導致錯誤結果出現；另外，現有的HA阻斷劑的制備方法復雜，不適合規模化生產，難以推廣使用。