[發(fā)明專(zhuān)利]免疫印跡一步法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010076482.4
• 申請(qǐng)日: 2020-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111257557B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃長(zhǎng)青;程瑤;雷雅君;趙騫
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 武漢愛(ài)博泰克生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/541
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/541
• 代理公司: 武漢世躍專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 42273
• 代理人: 倪婭

1.一種免疫印跡一步法，它采用的試劑包括二抗和良級(jí)一抗，其特征在于，步驟為： a)樣品依次進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜； b)轉(zhuǎn)膜后，將印跡膜與二抗和良級(jí)一抗同時(shí)孵育，直至達(dá)到后續(xù)顯色標(biāo)準(zhǔn)； c)隨后洗膜進(jìn)行顯色；其中，所述二抗為與良級(jí)一抗能匹配使用的二抗；所述良級(jí)一抗為通過(guò)抗體分級(jí)方法檢測(cè)的一抗；所述抗體分級(jí)方法為:采樣三個(gè)或以上不同生物類(lèi)別來(lái)源的樣本，經(jīng)常規(guī)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)后，進(jìn)行曝光，所產(chǎn)生條帶結(jié)果滿(mǎn)足條件的為良級(jí)一抗，所述條件為： 1)至少3個(gè)泳道有單一目的條帶，有目的條帶的泳道無(wú)雜帶，其余泳道無(wú)帶；或2)至少3個(gè)泳道有單一目的條帶且有目的條帶的泳道有雜帶，雜帶位于與目的條帶間隔2個(gè)marker以上的位置；所述條帶為經(jīng)圖像識(shí)別軟件分析，灰度值180以上的條帶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述抗體分級(jí)方法中，同一生物類(lèi)別來(lái)源的所述樣本的數(shù)量大于等于3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述生物類(lèi)別為人、小鼠和大鼠。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述抗體分級(jí)方法中，常規(guī)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)時(shí)，總蛋白上樣量為30μg，抗體1:1000稀釋?zhuān)黄毓鈺r(shí)間為1s。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述步驟b)中孵育過(guò)程還添加有穩(wěn)定劑、保護(hù)劑、防腐劑，其中，所述防腐劑為硫柳汞，所述保護(hù)劑為氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、氯化鉀，所述穩(wěn)定劑為甘油。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述步驟b)中孵育時(shí)間為90～120min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫印跡一步法，其特征在于：所述步驟c)洗膜為多次，采用洗劑為T(mén)BST。