[發(fā)明專利]一種兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010076386.X
• 申請(qǐng)日: 2020-01-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111073887A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁勇;常瑋;邵亞林;劉小燭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 北京東方盛凡知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11562
• 代理人: 張雪

1.一種兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1：液氮中研磨兜蘭植物成熟葉片成粉末，向所得粉末中加入Trizol試劑和β-巰基乙醇，渦旋振蕩充分裂解，得到裂解液；

步驟2：將裂解液離心取上清液，并向上清液中加入氯仿，振蕩混勻，室溫靜置5min后離心,取上清液；

步驟3：重復(fù)步驟2的操作2-3次，之后，向所得上清液中加入沉淀劑，充分混勻后，-20℃靜置10-15min；

步驟4：將步驟3中靜置結(jié)束的混合液離心，棄上清取沉淀，并用洗滌液洗滌所述沉淀2-3次，離心，棄洗滌液后，風(fēng)干，得到產(chǎn)品RNA。

2.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟1中所述粉末：Trizol試劑按質(zhì)量體積比為1:10添加，所述粉末：β-巰基乙醇按質(zhì)量體積比為1：0.2添加。

3.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟3中所述沉淀劑為預(yù)冷的異丙醇，所述預(yù)冷的異丙醇為4℃冷處理0.5-1.0h，所述預(yù)冷的異丙醇與步驟3中所述上清液等體積添加。

4.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟4中所述洗滌液為體積分?jǐn)?shù)為75％乙醇。

5.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟1-步驟4中離心條件均為：4℃12000rpm離心5min。

6.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟4中棄去洗滌液后，在超凈工作臺(tái)風(fēng)干5-10min，然后用DEPC水溶解沉淀，于-80℃保存。

7.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟1中成熟葉片為采集的新鮮成熟葉片，用蒸餾水處理表面的污物，然后用脫脂棉吸干水分，按需要的質(zhì)量稱量后置于液氮中速凍，并轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存所得。

8.如權(quán)利要求1所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法，其特征在于，步驟1中所述兜蘭植物為紫紋兜蘭、長(zhǎng)瓣兜蘭或杏黃兜蘭。

9.如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的兜蘭植物高質(zhì)量總RNA的提取方法在基因克隆、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析不同研究中的應(yīng)用。