[發明專利]一種結核分枝桿菌刺激抗原的制備方法

有效

• 申請號: 202010076333.8
• 申請日: 2020-01-23
• 公開（公告）號: CN111269297B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 劉梁濤;李新樂;尚朋林;張文婧;趙巧輝;李歡歡;李桂林;付光宇;吳學煒;楊增利
• 申請（專利權）人: 鄭州伊美諾生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N15/70;C12N15/31;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

1.結核分枝桿菌刺激抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.編碼權利要求1所述結核分枝桿菌刺激抗原的多核苷酸。

3.根據權利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一種核酸載體，包括權利要求2或3所述的多核苷酸。

5.根據權利要求4所述的核酸載體，其特征在于，其骨架載體為pET30a。

6.重組宿主，轉化有權利要求4或5所述的核酸載體。

7.根據權利要求6所述的重組宿主，其特征在于，所述宿主為大腸桿菌。

8.結核分枝桿菌刺激抗原的制備方法，包括：培養權利要求6或7所述的重組宿主，誘導結核分枝桿菌刺激抗原的表達。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于，

所述培養步驟的條件為：37℃，壓力0.05Mpa，溶氧40％，攪拌速度為200-400rpm；以氨水調節pH值為6.8～7.0，培養至OD₆₀₀值為5.0～7.0；

所述培養步驟中：培養基包括水和葡萄糖40g/L，酵母粉50g/L，磷酸二氫鈉4.2g/L，磷酸氫二鉀8.7g/L，硫酸銨5.5g/L，硫酸鎂2.5g/L，微量元素溶液2.2ml/L。

10.根據權利要求8或9所述的制備方法，其特征在于，

所述誘導步驟具體包括：

16℃，以濃度為0.5mM的IPTG誘導，溶氧濃度為30％，攪拌速度為275～350rpm，pH值為7.0～7.2；

誘導7～8h后，以1.5～3.5mL/min的速度補加補料培養基，攪拌速度為275-350rpm，溶氧濃度為30％；

補料培養基包括水和葡萄糖1000g/L，酵母粉400g/L，磷酸二氫鈉12.6g/L，磷酸氫二鉀26g/L，硫酸銨16.5g/L，硫酸鎂20g/L，微量元素溶液12ml/L。

11.根據權利要求9或10所述的制備方法，其特征在于，所述微量元素溶液包括水和CoCl₂·6H₂O 2.1mg/L，MnCl₂·4H₂O 13mg/L，H₃BO₃3mg/L，鉬酸鈉2.5mg/L，檸檬酸鐵12.5mg/L，EDTA8.4mg/L。

12.權利要求1所述的結核分枝桿菌刺激抗原或權利要求8～11任一項所述方法制備的抗原在制備刺激γ-干擾素產生的試劑中的應用。