[發明專利]一種體外模擬細胞因子釋放對間接靶細胞表型影響的方法

在審

• 申請號: 202010075799.6
• 申請日: 2020-01-22
• 公開（公告）號: CN113150981A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 張斌;孫耀;趙龍
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第五醫學中心
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/00;C12N5/10;C12N5/09;C12N5/077;C12N5/0781;C12N5/0783;C12N5/0786
• 代理公司: 上海市錦天城律師事務所 31273
• 代理人: 汪妍瑜

1.一種在體外模擬CRS對其它細胞影響的系統，具有上層隔室和下層隔室，上下層隔室之間通過微孔膜隔開，其特征再于上層隔室中A細胞B細胞共培養，在下層隔室中放入C細胞。

2.如權利要求1所述的系統，其特征在于：

A細胞選自靶向CD123 CD19，CD20，CD22，BCMA，MUC-1之一的CAR-T細胞。

3.如權利要求1或2所述的系統，其特征在于：B細胞為A細胞所對應靶細胞，為靶抗原陽性細胞或靶抗原陰性細胞，選自以下細胞或細胞系之一：白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、肝癌、肺癌、腎癌的細胞系及原代細胞，或人體正常組織原代細胞系及原代細胞。

4.如權利要求3所述的系統，其特征在于：B細胞為陽性對照組或實驗組，選自人白血病細胞系MOLM-13、原代AML細胞、原代AML-2、原代AML-3。

5.如權利要求1所述的系統，其特征在于：C細胞選自在細胞因子釋放綜合癥中參與或受影響的單核細胞，巨噬細胞，T細胞，B細胞，平滑肌細胞，基質細胞，腫瘤細胞。

6.如權利要求5所述的系統，其特征在于：C細胞為間接靶細胞，選自HUVEC，PBMCs，CD34+G-PBMCs。

7.如權利要求1所述的系統，其特征在于：微孔膜的孔徑小于3μm。

8.使用如權利要求1-7之一模擬CRS對其它細胞影響的系統的方法，其特征在于包括以下步驟：

1)將A細胞與B細胞在上層隔室共孵育；

2)在下層隔室中加入需要研究的C細胞；

3)共孵育一定時間后，收集下層C細胞進行表型的檢測，收集培養基進行細胞因子檢測或凍存備用。

9.如權利要求7所述的使用方法，其特征在于：

A細胞為T細胞，通過采集人外周血獲得并通過淋巴細胞分離液分離得到PBMCs，PBMCs通過CD3/CD28磁珠活化，并在X-VIVO-15+10％FBS，IL-250IU/ml條件下培養。

10.如權利要求7所述的使用方法，其特征在于：

A細胞選自靶向CD123 CD19，CD20，CD22，BCMA，MUC-1之一的CAR-T細胞。

11.如權利要求7所述的使用方法，其特征在于：B細胞為A細胞所對應靶細胞，為靶抗原陽性細胞或靶抗原陰性細胞，選自以下細胞或細胞系之一：白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、肝癌、肺癌、腎癌的細胞系及原代細胞，或人體正常組織原代細胞系及原代細胞。

12.如權利要求11所述的使用方法，其特征在于：B細胞為陽性對照組或實驗組，選自人白血病細胞系MOLM-13、原代AML細胞、原代AML-2、原代AML-3。

13.如權利要求7所述的使用方法，其特征在于：C細胞選自在細胞因子釋放綜合癥中參與或受影響的單核細胞，巨噬細胞，T細胞，B細胞，平滑肌細胞，基質細胞，腫瘤細胞。

14.如權利要求13所述的使用方法，其特征在于：C細胞為間接靶細胞，選自HUVEC，PBMCs，CD34+G-PBMCs。