[發明專利]一種基因槍介導的玉米骨干自交系的遺傳轉化方法

有效

• 申請號: 202010074929.4
• 申請日: 2020-01-22
• 公開（公告）號: CN111154797B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發明（設計）人: 武瑩;李宏潮;楊進孝;馮峰
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46;A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種基因槍介導的玉米骨干自交系的遺傳轉化方法。所述方法包括如下步驟：1)采用基因槍法將含有目的基因的載體轟擊至玉米自交系京724幼胚中，得到槍擊后幼胚；2)將所述槍擊后幼胚接種至愈傷誘導培養基中進行培養，得到胚性愈傷組織；3)將所述胚性愈傷組織接種至篩選培養基中進行培養，得到抗性愈傷；4)將所述抗性愈傷接種至再生培養基中進行培養，得到幼苗；5)將所述幼苗在生根培養基中培養，得到玉米自交系京724轉基因植株。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種玉米骨干自交系的遺傳轉化方法，特別涉及一種基因槍介導的玉米骨干自交系京724的遺傳轉化方法。

背景技術

玉米是糧食、飼料、工業原材料供給的重要作物，在人口增長、畜牧業、工業高速的發展的現代具有重要地位。據農業部統計，2017/2018年度我國玉米供需缺口430萬噸，根據玉米行業發展趨勢報告分析，在2016-2030年期間中國玉米產量的增長速度會有所下降，而玉米總消費量的增長速度將會明顯超出產量的增長速度，國內供需缺口將會進一步擴大。若在不擴大種植面積的情況下，應對玉米的需求趨勢而言，玉米生產方式方法則需不斷優化升級。隨分子育種技術的發展，借助分子輔助育種、轉基因技術、基因編輯技術等現代育種技術與傳統育種技術的綜合應用，可對抗除草劑、抗蟲、抗病、品質、產量等農藝性狀的改良提供有力的助推。

自上世紀90年代以來，針對玉米的遺傳轉化研究快速發展，雖轉化受體材料從原生質體、懸浮細胞系、花藥、幼穗、幼胚、組織生長點到成熟胚均有涉獵，轉化方式亦從PEG轉化、基因槍介導、農桿菌介導、花粉管導入到納米介導各有千秋，但借助上述路徑并能穩定獲得轉化陽性植株，且具優良農藝性狀及應用價值的玉米自交系仍待拓展。

玉米骨干自交系京724作為京科968的親本之一，具有籽粒產量高、抗病性好、配合力高的優良特性。但對于玉米骨干自交系京724而言，目前還沒有關于其高效組培及遺傳轉化方法的報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種基因槍介導的玉米骨干自交系京724的高效遺傳轉化方法。

本發明提供的基因槍介導的玉米骨干自交系京724的高效遺傳轉化方法包括如下步驟：

1)采用基因槍法將含有目的基因的載體轟擊至玉米自交系京724幼胚中，得到槍擊后幼胚；

2)將所述槍擊后幼胚接種至愈傷誘導培養基中進行培養，得到胚性愈傷組織；

3)將所述胚性愈傷組織接種至篩選培養基中進行培養，得到抗性愈傷；

4)將所述抗性愈傷接種至再生培養基中進行培養，得到幼苗；

5)將所述幼苗在生根培養基中培養，得到玉米自交系京724轉基因植株。

上述方法中，所述1)中，所述玉米自交系京724幼胚在轟擊前還包括在高滲培養基中進行培養的步驟。所述培養時間具體可為4-6h。

進一步的，所述幼胚為從幼穗上剝離獲得的幼胚；所述幼穗為待玉米籽粒最大直徑為4-4.5mm時采摘的幼穗。

更進一步的，所述轟擊參數具體可為1150psi氦氣壓力，27InHg真空度，9cm射擊距離。

所述含有目的基因的表達載體具體可為pY105重組載體。

上述方法中，所述2)包括如下步驟：將槍擊后幼胚先在高滲培養基中培養(培養時間具體可為4-6h或4h或5h或6h)，然后轉移至所述愈傷誘導培養基中培養至幼胚表面有愈傷突起時再轉移至篩選培養基中。