[發(fā)明專利]一種同時檢測血液樣品中多種水溶性維生素的方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010074354.6
• 申請日: 2020-04-01
• 公開（公告）號: CN111175406B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張召;刁嘉茵;雷春燕;肖妮;陳濤
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東南芯醫(yī)療科技有限公司;廣東一元蘭欣生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
• 代理公司: 廣州嘉權(quán)專利商標事務(wù)所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發(fā)明公開了一種同時檢測血液樣品中多種水溶性維生素的方法，首先通過簡單的提取方法對生物樣本進行前處理，然后進入色譜分離及質(zhì)譜檢測，針對每種維生素分別選擇一對定性離子和一對定量離子，以各種維生素的相對保留時間和定性離子對作為定性依據(jù)，以標準品制作標準曲線定量。同時，本方法應(yīng)用三個水平的質(zhì)控品考察方法的準確性、有效性，避免檢測結(jié)果失真。本發(fā)明首次實現(xiàn)了應(yīng)用LC?MS技術(shù)對一份血清樣本中的十三種水溶性維生素同時檢測的目的，減小了干擾物影響，該方法操作簡便快速分析時間僅10min，高通量、成本低，有效監(jiān)測人體內(nèi)水溶性維生素水平，對維生素的合理、安全補充具有指導(dǎo)意義，易于臨床推廣及普及。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于維生素分析檢測領(lǐng)域，涉及一種同時檢測血液樣品中多種水溶性維生素的方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

維生素，分為脂溶性和水溶性維生素兩類，是維持人體生命活動必須的一類有機物質(zhì)，也是保持人體健康的重要活性物質(zhì)。維生素缺乏或過量均會導(dǎo)致營養(yǎng)性疾病的發(fā)生，維生素B1，維生素B2，維生素B3-煙酸，維生素B3-煙酰胺，維生素B5，維生素B6-吡哆胺，維生素B6-吡哆醛，維生素B6-吡哆醇，維生素B7，維生素B9，維生素B12，維生素B13和維生素C均屬于水溶性維生素，人體十三種水溶維生素缺乏或過量時會表現(xiàn)出不同的癥狀：維生素B1缺乏會導(dǎo)致腳氣病；厭食、腹脹、消化不良、便秘；心臟功能失調(diào)等；維生素B2缺乏會導(dǎo)致舌炎、口角炎；脂溢性皮炎；妊娠婦女缺鐵性貧血等；維生素B3缺乏可產(chǎn)生糙皮病，表現(xiàn)為皮炎、舌炎、口咽、腹瀉及煩躁、失眠感覺異常等癥狀等；維生素B5缺乏會導(dǎo)致痛風(fēng)或風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；低血糖等；維生素B6缺乏會導(dǎo)致慢性炎癥；神經(jīng)興奮性增強、煩躁不安、睡眠不安、全身性抽搐等；維生素B7缺乏會導(dǎo)致皮炎、濕疹、生長遲緩；維生素B9缺乏會導(dǎo)致巨幼紅細胞性貧血；高同型半胱氨酸血癥；流產(chǎn)、早產(chǎn)、胎兒神經(jīng)血管畸形、先天愚形。維生素B12缺乏會產(chǎn)生巨紅細胞性貧血(惡性貧血)，脊髓變形，神經(jīng)和周圍神經(jīng)退化等；牙齦出血以及惡心、食欲不振、體重減輕等癥狀；維生素B13具有改善肝功能，促進肝細胞的修復(fù)作用和其它新功能。可治療痛風(fēng)病，改進腦血管循環(huán)，增加吞噬細胞活性，提高組織再生能力，有助于治愈傷口。還可用于免疫輔藥；維生素C缺乏會壞血癥；口瘡和口腔潰瘍、牙齦出血、牙齒松動、皮膚色素沉著等癥狀。

現(xiàn)有技術(shù)中，常用的維生素檢測方法主要包括毛細管電泳法、電化學(xué)分析法、高效液相色譜法、高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等。其中電泳法、電化學(xué)法、高效液相色譜法存在一定的缺點，如：結(jié)果差異大、線性差、衍生化操作復(fù)雜、通量小等。而液相色譜質(zhì)譜具有高靈敏度、高精確度、高通量的特點，因此，研究出一種基于液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的方法測定體內(nèi)維生素并將其應(yīng)用于臨床愈發(fā)顯得重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種檢測血液樣品中多種水溶性維生素的液質(zhì)聯(lián)用分析方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

本發(fā)明第一方面，提供了一種血液水溶性維生素的檢測方法，采用液質(zhì)聯(lián)用方法進行檢測，包括以下步驟：

一.溶液的制備

供試品溶液制備：取樣品加入到甲醇、乙腈溶液中，混勻離心，取上清后再加入水：甲醇，得供試品溶液；

標準品溶液的制備：將各標準品用甲酸和甲醇/水溶液溶解配制成標準品母液，將各標準品母液液用乙腈/甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混合標準品溶液；

內(nèi)標溶液制備：將各內(nèi)標用甲酸和甲醇/水溶液溶解配制成標準品母液，將各標準品母液液用乙腈/甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混內(nèi)標溶液；

二.測定

將上述制備的供試品溶液、標準品和內(nèi)標溶液進行LC-MS測定。通過本發(fā)明使用超高效液相色譜-質(zhì)譜法檢測血清中十三種水溶性維生素，特異性強，靈敏性高，通量高，結(jié)果客觀易于分析，尤其適合臨床普及應(yīng)用。

根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述樣品為血漿或血清樣品。