[發明專利]一種基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法

在審

• 申請號: 202010071284.9
• 申請日: 2020-01-21
• 公開（公告）號: CN111849970A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 劉巧泉;黃李春;李錢峰;張昌泉;范曉磊
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，包括步驟：對稻米Wx基因啟動子進行改造。

2.如權利要求1所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，還包括以下特征中的一項或多項：

a.對稻米Wx基因啟動子進行改造時，所針對的靶序列如SEQ ID NO：1-7任一所示；

b.所述稻米選自水稻。

3.如權利要求2所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，對稻米Wx基因啟動子進行改造時，采用CRISPR系統對稻米Wx基因啟動子中的靶序列進行編輯。

4.如權利要求3所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，包括如下步驟：

(1)利用CRISPR系統根據稻米Wx基因啟動子序列設計gRNA；

(2)構建含有gRNA片段的中間載體；

(3)利用步驟(2)所述的中間載體構建含有gRNA片段的CRISPR/Cas9載體；

(4)利用步驟(3)所述的CRISPR/Cas9載體獲得轉基因苗；

(5)培養并篩選步驟(4)所述的轉基因苗，獲得突變植株。

5.如權利要求4所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，還包括以下特征中的一項或多項：

a.所述中間載體選自質粒載體；

b.所述CRISPR/Cas9載體選自pC1300-Cas9載體。

6.如權利要求5所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，所述中間載體選自pBlueScript(SK+)載體。

7.如權利要求4所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，步驟(4)包括以下步驟：

(41)將步驟(3)所述的CRISPR/Cas9載體轉入到宿主細胞中；

(42)利用宿主細胞侵染稻米，獲得轉基因苗。

8.如權利要求4所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，步驟(5)包括以下步驟：

(51)提取步驟(4)獲得的轉基因苗的DNA，用引物SEQ ID NO：22-29進行擴增，測序；

(52)將有突變的植株進一步種植，篩選純合株系，去除轉基因痕跡，經過多代篩選，獲得純合突變植株。

9.如權利要求7所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，所述宿主細胞選自工程菌。

10.如權利要求9所述的基于直鏈淀粉含量的稻米培育篩選方法，其特征在于，所述宿主細胞選自EHA105菌株。