[發(fā)明專利]一種檢測IL-6的試劑盒及檢測IL-6的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010069721.3
• 申請日: 2020-01-21
• 公開（公告）號: CN111239414B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李倩;徐祎春;歐瑩;趙英楠
• 申請（專利權(quán)）人: 上海生物芯片有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權(quán)

1.一種檢測IL-6的免疫熒光試劑盒，其特征在于，包被有捕獲抗體的羧基磁珠、生物素化的IL-6檢測抗體、親和素偶聯(lián)的β-半乳糖苷酶、酶反應(yīng)發(fā)光底物、干粉或溶液狀態(tài)的IL-6標準品、用于配制標準品溶液、質(zhì)控品溶液、樣品稀釋液；所述捕獲抗體為能與人IL-6抗原不同表位特異性結(jié)合的單克隆抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述生物素化的IL-6檢測抗體為能與IL-6抗原不同表位特異結(jié)合的單克隆抗體；所述兩種單克隆抗體與IL-6抗原的親和力測定時需滿足解離常數(shù)K_D＜10^-9?M。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，包被有捕獲抗體的羧基磁珠的使用數(shù)量為3.0×10⁸~5.0×10⁸個。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述包被有捕獲抗體的羧基磁珠的使用數(shù)量為4.2×10⁸個。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，親和素偶聯(lián)的β-半乳糖苷酶的使用濃度為30~80?pM。

6.?根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述親和素偶聯(lián)的β-半乳糖苷酶的使用濃度為50?pM。

7.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，生物素化的IL-6檢測抗體的工作濃度為0.15~0.25?μg/mL。

8.?根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述生物素化的IL-6檢測抗體的工作濃度為0.2?μg/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述標準品溶液是使用所述已知濃度的IL-6標準品和所述稀釋液配制得到；所述標準品溶液的濃度分別為：30?pg/mL、10?pg/mL、3.33?pg/mL、1.11?pg/mL、0.37?pg/mL、0.123?pg/mL、0.041?pg/mL和0?pg/mL；所述質(zhì)控品溶液是使用所述已知濃度的IL-6標準品和所述稀釋液配制得到；所述質(zhì)控品溶液的濃度分別為：2?pg/mL和20?pg/mL。

10.一種采用權(quán)利要求1-9任一項所述的試劑盒檢測IL-6的方法，其特征在于，采用三步法孵育包被有IL-6捕獲抗體的磁珠試劑、生物素化的IL-6檢測抗體、待檢物和鏈霉親和素β-半乳糖苷酶SBG試劑。

11.?如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，25?μL包被有IL-6捕獲抗體的磁珠試劑與100?μL待檢物孵育30min，得混合液一。

12.?如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，向所述混合液一中加入100?μL?IL-6檢測抗體試劑，孵育5min，得混合液二。

13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，向所述混合液二中加入100?μL?50pM的鏈霉親和素β-半乳糖苷酶SBG試劑，孵育5min。