[發明專利]一種綿羊精液常溫保存的稀釋液的制備方法

在審

• 申請號: 202010068814.4
• 申請日: 2020-01-21
• 公開（公告）號: CN111226907A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 李擁軍;張柳明;馮云奎;馬金亮;王健
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 揚州蘇中專利事務所(普通合伙) 32222
• 代理人: 沈志海

本發明涉及一種綿羊精液常溫保存的稀釋液的制備方法，包括以下步驟：步驟1）、將30.2～31.2gTris、15.9～16.9g檸檬酸、19.5～20.5g果糖、0.3～0.4g青霉素鈉、0.6～0.7g鏈霉素硫酸鹽溶解于1000mL滅菌的超純水中，得到基礎稀釋液；步驟2）、當取95mL基礎稀釋液，向95mL基礎稀釋液中添加5mL的卵黃，得到第一稀釋液；當取85mL基礎稀釋液，向85mL基礎稀釋液中添加15mL的卵黃，得到第二稀釋液；當取80mL基礎稀釋液，向80mL基礎稀釋液中添加20mL的卵黃，得到第三稀釋液；將第一稀釋液、第二稀釋液、第三稀釋液放入冰箱使其充分溶解，然后10000r/min、4℃條件下離心20min，離心后取出上清液，即得到濃度為5%卵黃稀釋液、濃度為15%卵黃稀釋液、濃度為20%卵黃稀釋液。通過發明提供的稀釋液，提高了精液保存效果。

技術領域

本發明涉及一種綿羊精液常溫保存的稀釋液的制備方法，屬于綿羊繁殖技術領域。

背景技術

人工受精技術是家畜繁殖中的一項基本技術，能夠充分地利用優良種公畜的精液，是一種提高家畜生殖效率和生產力的重要手段。人工授精技術可以降低養殖成本，防止疾病的傳播，實現規模化的飼養和管理。精液保存則是人工授精技術中的關鍵環節。精液保存通常分為常溫保存、低溫保存和冷凍保存。在實際生產中，精液保存大多采用常溫保存，其具有處理操作過程簡單、適合推廣應用、無需特殊的控溫及制冷設備等優點，具有實際的應用價值。現有的綿羊精液常溫保存稀釋液配方其精子活力在保存96小時開始快速下降，嚴重影響了精液品質。

精液低溫保存和超低溫冷凍保存通常都添加卵黃，在豬、狗和兔等物種的精液稀釋液中也都有添加應用。不同的卵黃如雞蛋、鴨蛋等在不同哺乳動物的精液保存中也都有應用。卵黃可以發揮抗凍保護劑和提供能量兩大作用。Phihphs最早把卵黃作為抗凍保護劑添加到稀釋液中，有效降低了精子細胞在降溫過程中受到的損傷，取得了較好的效果。卵黃中的低密度脂蛋白聚集在精子膜的表面，減少了精子的冷休克，在精液冷凍保存中發揮了關鍵作用。除此之外，卵黃可以調節稀釋液中的滲透壓和電解質的濃度，使其環境適宜精液保存，同時降低了對精子膜的影響，延長了有效存活時間和總存活時間。卵黃在精液低溫保存和冷凍保存中既然可以發揮一定的作用，且在綿羊精液常溫保存上的研究鮮有報道。

為此，有必要通過研究卵黃的作用來發明可以提高綿羊精液常溫保存品質的稀釋液配方，來提高人工受精技術的效率，降低精液保存的成本，滿足實際生產的需要。

發明內容

本發明的目的就是針對上述現有問題，提供一種綿羊精液常溫保存的稀釋液的制備方法，提供卵黃在綿羊精液常溫保存的稀釋液配方中的應用效果，用于解決現有技術中，綿羊精液保存后期精子活力快速下降的問題，使其延長精液的保存時間，根據不同的時間要求，選擇不同效果的稀釋液配方。

本發明的目的是這樣實現的，一種綿羊精液常溫保存的稀釋液的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

步驟1)、將30.2～31.2gTris、15.9～16.9g檸檬酸、19.5～20.5g果糖、0.3～0.4g青霉素鈉、0.6～0.7g鏈霉素硫酸鹽溶解于1000mL滅菌的超純水中，得到基礎稀釋液；

步驟2)、當取95mL經步驟1)配制的基礎稀釋液，向95mL基礎稀釋液中添加5mL的卵黃，得到第一稀釋液，然后將第一稀釋液放入冰箱使其充分溶解，然后10000r/min、4℃條件下離心20min，離心后取出上清液，即得到卵黃濃度為5％的卵黃稀釋液；

當取85mL經步驟1)配制的基礎稀釋液，向85mL基礎稀釋液中添加15mL的卵黃，得到第二稀釋液，然后將第二稀釋液放入冰箱使其充分溶解，然后10000r/min、4℃條件下離心20min，離心后取出上清液，即得到卵黃濃度為15％的卵黃稀釋液；