[發明專利]副溶血性弧菌特異性新分子靶標及其快速檢測方法

有效

• 申請號: 202010068269.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111154901B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 吳清平;相欣然;葉青華;張菊梅;龐銳;雷濤;王涓;古其會;韋獻虎;張友雄;曾海燕
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）;廣東環凱生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/63
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭

1.核苷酸序列組合作為被檢測靶標在非疾病診斷和治療目的的鑒別副溶血性弧菌的應用，其特征在于，所述核苷酸序列組合如SEQ ID NO.1 - SEQ ID NO.20所示。

2.用于鑒別副溶血性弧菌的引物組，其特征在于，所述引物組為根據如權利要求1所述核苷酸序列組合設計得到；所述引物組的序列按5’到3’如SEQIDNO.21~60所示；其中：

SEQ ID NO.21和SEQ ID NO.22為對應SEQ ID NO.1序列的引物對；

SEQ ID NO.23和SEQ ID NO.24為對應SEQ ID NO.2序列的引物對；

SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26為對應SEQ ID NO.3序列的引物對；

SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28為對應SEQ ID NO.4序列的引物對；

SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30為對應SEQ ID NO.5序列的引物對；

SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32為對應SEQ ID NO.6序列的引物對；

SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34為對應SEQ ID NO.7序列的引物對；

SEQ ID NO.35和SEQ ID NO.36為對應SEQ ID NO.8序列的引物對；

SEQ ID NO.37和SEQ ID NO.38為對應SEQ ID NO.9序列的引物對；

SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40為對應SEQ ID NO.10序列的引物對；

SEQ ID NO.41和SEQ ID NO.42為對應SEQ ID NO.11序列的引物對；

SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44為對應SEQ ID NO.12序列的引物對；

SEQ ID NO.45和SEQ ID NO.46為對應SEQ ID NO.13序列的引物對；

SEQ ID NO.47和SEQ ID NO.48為對應SEQ ID NO.14序列的引物對；

SEQ ID NO.49和SEQ ID NO.50為對應SEQ ID NO.15序列的引物對；

SEQ ID NO.51和SEQ ID NO.52為對應SEQ ID NO.16序列的引物對；

SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54為對應SEQ ID NO.17序列的引物對；

SEQ ID NO.55和SEQ ID NO.56為對應SEQ ID NO.18序列的引物對；

SEQ ID NO.57和SEQ ID NO.58為對應SEQ ID NO.19序列的引物對;

SEQ ID NO.59和SEQ ID NO.60為對應SEQ ID NO.20序列的引物對。

3.如權利要求2所述引物組在非疾病診斷和治療目的的鑒別副溶血性弧菌中的應用。

4.用于鑒別副溶血性弧菌的非疾病診斷和治療目的的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：使用如權利要求2所述引物組對待測樣品DNA進行PCR擴增；

S2：進行凝膠電泳檢測擴增產物；

S3：觀察引物組中各引物對對應產物大小的位置是否存在單一擴增條帶，如果存在，說明待測樣品中含有副溶血性弧菌；如果沒有出現相應的單一擴增條帶，則待測樣品中不含有副溶血性弧菌。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，S1中的PCR擴增體系包括PCR反應緩沖液、酶、MgCl₂、dNTP、模板DNA、引物組和滅菌雙蒸水。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系為：10×PCR反應緩沖液2.5 μL，25mM MgCl₂ 2μL，2.5mM dNTP 1μL，Tag酶1U，模板DNA100ng，5 μM上下游引物各1 μL，滅菌雙蒸水補足體積至25 μL。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，S1中的PCR擴增程序為：95℃預變性5 min；95℃變性30 s；58℃退火30 s；72℃延伸45 s；變性、退火、延伸共進行30個循環；最后72℃延伸10 min。