[發明專利]銅綠假單胞菌特異性新分子靶標及其快速檢測方法

有效

• 申請號: 202010068197.8
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111154900B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 吳清平;王楚芳;葉青華;古其會;張菊梅;王涓;吳慧清;魏磊;李瀅;丁郁
• 申請（專利權）人: 廣東省微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）;廣東環凱生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/385
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭

1.核苷酸序列組合作為被檢測靶標在非疾病診斷和治療目的的鑒別銅綠假單胞菌的應用，其特征在于，所述核苷酸序列組合如SEQ ID NO.1 - SEQ ID NO.3所示。

2.用于鑒別銅綠假單胞菌的引物組，其特征在于，所述引物組為根據如權利要求1所述核苷酸序列組合設計得到；所述引物組的序列按5’到3’如SEQIDNO.4~9所示；其中：

SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5為對應SEQ ID NO.1序列的引物對；

SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7為對應SEQ ID NO.2序列的引物對；

SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9為對應SEQ ID NO.3序列的引物對。

3.如權利要求2所述引物組在非疾病診斷和治療目的的鑒別銅綠假單胞菌中的應用。

4.用于鑒別銅綠假單胞菌的非疾病診斷和治療目的的方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1：使用如權利要求2所述引物組對待測樣品DNA進行PCR擴增；

S2：進行凝膠電泳檢測擴增產物；

S3：觀察引物組中各引物對對應產物大小的位置是否存在單一擴增條帶，如果存在，說明待測樣品中含有銅綠假單胞菌；如果沒有出現相應的單一擴增條帶，則待測樣品中不含有銅綠假單胞菌。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，S1中的PCR擴增體系包括PCR反應緩沖液、酶、MgCl₂、dNTP、模板DNA、引物組和滅菌雙蒸水。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增體系為：10×PCR反應緩沖液2.5 μL，25mM MgCl₂ 2μL，2.5mM dNTP 1μL，Tag酶1U，模板DNA100ng，5 μM上下游引物各1 μL，滅菌雙蒸水補足體積至25 μL。

7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，S1中的PCR擴增程序為：98℃預變性3 min；95℃變性30 s；58℃退火30 s；72℃延伸60 s；變性、退火、延伸共進行35個循環；最后72℃延伸10 min。