[發(fā)明專(zhuān)利]中華絨螯蟹5-HT2B受體基因及其克隆方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010067121.3
• 申請(qǐng)日: 2020-01-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111378669A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊筱珍;龐楊洋;成永旭
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海海洋大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/12
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/12;C12N15/10;C07K14/705
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 張潔

1.一種中華絨螯蟹5-HT2B受體基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種如權(quán)利要求1所述的中華絨螯蟹5-HT2B受體基因所編碼的蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，步驟如下：

(1)根據(jù)中華絨螯蟹5-HT2B受體的表達(dá)序列標(biāo)簽，分別設(shè)計(jì)3’-5-HT2B RACE上游引物和5’-5-HT2B RACE下游引物，將提取的中華絨螯蟹總RNA反轉(zhuǎn)錄成3’-cDNA和5’-cDNA第一鏈，以此為模板，分別采用3’-5-HT2B RACE上游引物、5’-5-HT2B RACE下游引物和通用引物進(jìn)行3’和5’末端側(cè)翼片段RACE，將得到的3’和5’末端側(cè)翼片段分別與載體連接，克隆并測(cè)序；

(2)將測(cè)序得到的末端側(cè)翼片段與5-HT2B受體的表達(dá)序列標(biāo)簽進(jìn)行拼接獲得拼接的5-HT2B受體的全長(zhǎng)序列，以該拼接的序列為模板，再在5’和3’非編碼區(qū)設(shè)計(jì)特異性基因全長(zhǎng)序列驗(yàn)證引物對(duì)全長(zhǎng)進(jìn)行驗(yàn)證，并消除個(gè)別不確定堿基，最終獲得中華絨螯蟹5-HT2B基因的全長(zhǎng)序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述3’-5-HT2B RACE上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述5’-5-HT2B RACE下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述載體為pM19T質(zhì)粒。

7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述步驟1)中通用引物如SEQ ID NO:7所示。

8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述步驟2)中基因全長(zhǎng)序列驗(yàn)證引物如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述中華絨螯蟹總RNA提取自胸神經(jīng)節(jié)和腸道組織。