[發明專利]中華絨螯蟹5-HT2B受體基因及其克隆方法

在審

• 申請號: 202010067121.3
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111378669A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 楊筱珍;龐楊洋;成永旭
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10;C07K14/705
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 張潔

1.一種中華絨螯蟹5-HT2B受體基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一種如權利要求1所述的中華絨螯蟹5-HT2B受體基因所編碼的蛋白，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，步驟如下：

(1)根據中華絨螯蟹5-HT2B受體的表達序列標簽，分別設計3’-5-HT2B RACE上游引物和5’-5-HT2B RACE下游引物，將提取的中華絨螯蟹總RNA反轉錄成3’-cDNA和5’-cDNA第一鏈，以此為模板，分別采用3’-5-HT2B RACE上游引物、5’-5-HT2B RACE下游引物和通用引物進行3’和5’末端側翼片段RACE，將得到的3’和5’末端側翼片段分別與載體連接，克隆并測序；

(2)將測序得到的末端側翼片段與5-HT2B受體的表達序列標簽進行拼接獲得拼接的5-HT2B受體的全長序列，以該拼接的序列為模板，再在5’和3’非編碼區設計特異性基因全長序列驗證引物對全長進行驗證，并消除個別不確定堿基，最終獲得中華絨螯蟹5-HT2B基因的全長序列。

4.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述3’-5-HT2B RACE上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示。

5.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述5’-5-HT2B RACE下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。

6.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述載體為pM19T質粒。

7.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述步驟1)中通用引物如SEQ ID NO:7所示。

8.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述步驟2)中基因全長序列驗證引物如SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示。

9.根據權利要求3所述的克隆中華絨螯蟹5-HT2B受體基因的方法，其特征在于，所述中華絨螯蟹總RNA提取自胸神經節和腸道組織。