[發(fā)明專利]一種參葵通脈顆粒的質量檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010066939.3
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN111239270B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發(fā)明（設計）人: 嚴士海;李七一;劉順;王海丹
• 申請（專利權）人: 江蘇省中醫(yī)院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/12;G01N30/14;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種參葵通脈顆粒7種有效成分的質量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)參葵通脈顆粒供試品溶液的制備：

參葵通脈顆粒，由江蘇省中醫(yī)院制劑室制備：稱取處方量的黃芪、靈芝、丹參、淫羊藿、黃蜀葵花、桂枝、茯苓、陳皮，依據(jù)優(yōu)選的最佳提取工藝，加入12倍水量，浸泡0.5h，加熱回流提取3次，每次1.5h，提取液合并，過濾，濾液減壓濃縮，離心，以適量糊精為輔料，置流化床中噴霧制粒，干燥，即得參葵通脈顆粒30g；

取參葵通脈顆粒0.625g，至50mL容量瓶中，加適量90％甲醇溶解，超聲30min，280W，50kHz，放至室溫，補足甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，收集續(xù)濾液，取適量續(xù)濾液于離心濃縮機蒸干，并用初始流動相30％乙腈，復溶至原體積的一半，加入適量混合內標溶液，混勻，即得供試品溶液；

(2)混合對照品溶液的制備：

分別精密稱取毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的對照品，分別置于10mL的容量瓶中，甲醇溶解、超聲，并定容至刻度，制得質量濃度分別為783μg/mL、852μg/mL、823μg/mL、1795μg/mL、804μg/mL、1064μg/mL和1828μg/mL的對照品溶液；然后分別吸取以上7種對照品溶液適量，置于同一10mL容量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度并混勻，制得濃度分別為142.636μg/mL、90.237μg/mL、299.823μg/mL、147.726μg/mL、324.526μg/mL、173.628μg/mL、617.404μg/mL的毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的混合對照品溶液；

(3)內標溶液的制備：

分別精密稱取替硝唑和咖啡酸對照品適量，置于10mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制得質量濃度分別為400μg/ml和390μg/ml的內標溶液；分別取適量內標溶液，用30％乙腈水溶液稀釋，得到濃度分別為16μg/mL和15.6μg/mL的替硝唑和咖啡酸的混合內標溶液；

(4)線性關系建立：

分別吸取步驟(2)的混合對照品溶液，用30％乙腈水溶液依次稀釋5倍，得到5個系列質量濃度的混合對照品溶液；然后取5個不同濃度的混合對照品溶液各180μL，分別加入25μL步驟(3)制備得到的混合內標溶液，渦旋混勻，然后依次取2μL注入超高效液相色譜儀進行測定；以質量濃度為橫坐標X，對照品與內標峰面積比值為縱坐標Y，進行線性回歸；得到毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷、丹酚酸B的線性回歸方程；

(5)含量測定

取步驟(1)的供試品溶液，加入適量混合內標溶液，混勻，然后取2μL注入超高效液相色譜儀進行測定；并根據(jù)步驟(4)的線性回歸方程，測定毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的含量；

步驟(4)和步驟(5)的色譜條件為：色譜柱：預柱Kromasil 100-3.5-C18，色譜柱Kromasil 100-3.5-C18，規(guī)格150×2.1mm；流動相：6.5mmoL/L乙酸銨水溶液為流動相A，乙腈為流動相B，梯度洗脫；自動進樣器溫度：10℃；柱溫：30℃；流速：0.2mL·min^-1；

梯度洗脫條件為：0～1.5min，30％B；1.5～6min，30～80％B；6～7.2min，80％B→95％B；7.2～7.8min，95％B；7.8～10.5min，95％B→30％B；10.5～12min，30％B；

毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷和丹酚酸B和內標物替硝唑和咖啡酸的質譜參數(shù)如下：

2.根據(jù)權利要求1所述的參葵通脈顆粒7種有效成分的質量檢測方法，其特征在于：毛蕊異黃酮葡萄糖苷、淫羊藿苷、黃芪甲苷、丹參素鈉、金絲桃苷、橙皮苷和丹酚酸B的線性回歸方程如下：

成分	回歸方程	2]]>
毛蕊異黃酮葡萄糖苷	Y＝0.0714845+0.172954*X	0.9923
淫羊藿苷	Y＝0.105823+0.650492*X	0.9974
黃芪甲苷	Y＝0.00112711+0.0024567*X	0.9930
丹參素鈉	Y＝-0.133008+0.0740296*X	0.9944
金絲桃苷	Y＝-1.18138+0.200215*X	0.9944
橙皮苷	Y＝-1.06837+0.394587*X	0.9908
丹酚酸B	Y＝-0.794318+0.0198573*X	0.9941

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