[發明專利]利拉魯肽衍生物及其制備方法

在審

• 申請號: 202010066293.9
• 申請日: 2020-01-20
• 公開（公告）號: CN113135990A
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發明（設計）人: 查若鵬;劉慧玲;唐亞連;陳衛;楊接運
• 申請（專利權）人: 寧波鯤鵬生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K19/00;C07K1/06;C07K1/20
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 肖艷;徐迅

本發明提供了一種制備利拉魯肽產品的方法。具體地，本發明的方法是對Boc修飾的利拉魯肽主鏈進行Fmoc修飾，并利用Fmoc修飾進行利拉魯肽的側鏈加成。本發明還提供該制備方法過程中涉及的Fmoc和Boc修飾的利拉魯肽主鏈以及包含利拉魯肽主鏈的融合蛋白。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，更具體地涉及一種GLP-1類似物利拉魯肽的衍生物及其制備方法。

背景技術

糖尿病是全球范圍內威脅人類健康的一大疾病。在中國，隨著人民生活方式的改變和老齡化進程的加快，糖尿病的患病率呈快速上升趨勢。糖尿病的急慢性并發癥，尤其是慢性并發癥累計多個器官，致殘、致死率高，嚴重影響患者的身心健康，并給個人、家庭和社會帶來沉重的負擔。

利拉魯肽是一種胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物,通過激活GLP-1受體,促進胰腺β細胞葡萄糖濃度依賴性地分泌胰島素,臨床用于治療2型糖尿病。

天然GLP-1極易被體內的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解，其血漿半衰期不足2分鐘，必須持續靜脈滴注或皮下注射才能產生療效。為了克服這一臨床問題，一系列的GLP-1類似物被開發，其中在2009年7月和2010年1月分別在歐盟和美國上市的利拉魯肽的療效最為顯著。利拉魯肽能夠顯著降低2型糖尿病患者空腹或者餐后的血糖而達到調節體內血糖水平，同時能夠降低患者體重和降低心血管疾病患者的死亡風險。

國內外關于利拉魯肽制備的報道很多，如美國專利US 6268343、6458924和7235627發明了一種基因重組技術得到利拉魯肽主鏈(主鏈)，即序列Arg³⁴GLP-1(7-37)，再通過液相合成方法連接Pal-Glu-(OSu)-OtBu物質得到利拉魯肽，由于利拉魯肽主鏈處于未保護的狀態，在連接過程中側鏈容易接在N末端氨基上，從而產生雜質，導致純化困難和收率較低的問題，工藝較復雜。

因此，本領域技術人員致力于開發新的、更長效的胰島素衍生物。

發明內容

本發明的目的在于提供利拉魯肽衍生物及其制備方法。

在本發明的第一方面，提供了一種Boc修飾的利拉魯肽主鏈，所述的Boc修飾的利拉魯肽主鏈的第20位為保護賴氨酸，并且，所述的保護賴氨酸為Nε-(叔丁氧羰基)-賴氨酸。

在另一優選例中，所述的保護賴氨酸的ε氨基是用叔丁氧羰基修飾的。

在另一優選例中，所述的利拉魯肽主鏈的N端被Fmoc修飾。

在另一優選例中，所述的Fmoc為芴甲氧羰基。

在另一優選例中，所述的利拉魯肽主鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.:7所示(HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRGRG，其中H為Fmoc修飾的組氨酸，K為Boc修飾的賴氨酸)。

在另一優選例中，所述的利拉魯肽主鏈用于利拉魯肽的合成。

在本發明的第二方面，提供了一種利拉魯肽主鏈融合蛋白，所述的利拉魯肽融合蛋白從N端到C端具有式I所示的結構：

FP-TEV-EK-GLP-1 (I)

式中，

“-”代表肽鍵；

FP為綠色熒光蛋白折疊單元；

TEV為第一酶切位點，較佳地為TEV酶酶切位點(如序列ENLYFQG所示，SEQ ID NO.:8)；

EK為第二酶切位點，較佳地為腸激酶酶切位點(如序列DDDDK所示，SEQ ID NO.:9)；

GLP-1代表本發明第一方面的所述的Boc修飾的利拉魯肽。