[發明專利]一種用于構建幼畜心肌炎細胞模型的細胞系及構建方法

在審

• 申請號: 202010061679.0
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111187751A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 王光祥;王艷華;張志東;李彥敏;楊能能
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種用于幼畜心肌炎細胞模型的細胞系，屬于生物醫學技術領域。所述細胞系為豚鼠心肌細胞，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C201932。同時提供了一種利用該細胞系建立口蹄疫病毒致幼畜心肌炎細胞模型的方法。與現有技術相比，本發明取得的有益效果為：本發明的細胞模型建立方法具有很好的重復性，在口蹄疫病毒易感試驗動物——豚鼠心肌原代細胞獲得后，可以直接使用口蹄疫病毒感染心肌原代細胞模型，進而在細胞水平和分子水平上對口蹄疫病毒對幼畜心肌炎致病機制進行深入研究。具有經濟、省時、表現均一，且重復性好的優點。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，更具體的說是涉及一種用于構建幼畜心肌炎細胞模型的細胞系及構建方法。

背景技術

口蹄疫(foot and mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot and mouthdisease virus,FMDV)感染動物引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。反芻動物、豬及超過70多種野生動物都易感FMDV，由于其傳播速度快、感染性強，造成嚴重的經濟和社會問題。

FMDV除引起偶蹄動物蹄、唇部水泡外還可引起幼畜的急性死亡，其致幼畜死亡的最主要原因是急性心肌炎。FMDV感染幼畜心臟致使心肌變性、壞死而出現灰白色或淡灰色斑點和條紋(又稱虎斑心)多不表現出FMD特有的臨床癥狀而急性死亡。在獸醫臨床上常見仔豬、羔羊和育肥牛因感染FMDV導致急性心肌炎而大批死亡的病例報道。

FMDV感染幼畜后導致心肌炎，但國內外關于口蹄疫病毒致幼畜心肌炎的致病機制研究都停留在組織水平。病毒感染引起心肌炎的發病機制尚不明確，目前普遍認為病毒性心肌炎，致病機制主要為：(1)病毒對心肌直接損傷；(2) 心肌細胞感染病毒后免疫損傷；(3)病毒感染細胞所致的心肌細胞凋亡。而關于FMDV致幼畜心肌炎致病機制細胞水平和分子水平的研究至今仍是空白。其原因主要是口蹄疫病毒致幼畜心肌炎細胞模型的建立存在困難，構建的細胞模型個體差異大、批次間差異大、對病毒不敏感，使研究心肌炎致病分子機制受到了限制。通常認為,成熟的心肌細胞是終末分化型細胞,不具備有絲分裂能力。成年動物心肌細胞中約有15％～20％較年輕的心肌細胞,保留著增殖的能力。但心肌細胞增殖潛能的大小尚未知曉,缺乏形態學和生物學資料，心肌細胞不易培養。

因此，提供一種差異小、對病毒敏感的構建幼畜心肌炎細胞模型的方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種用于構建幼畜心肌炎細胞模型的細胞系及構建方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種豚鼠心肌細胞系，所述細胞系為豚鼠心肌細胞系，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏單位地址：中國.武漢.武漢大學，保藏時間為2019年3月1 日，保藏編號為CCTCC NO：C201932，分類命名為豚鼠心肌細胞GPCM(Guinea pig Cardiomyocyte GPCM)。

豚鼠心肌細胞系在構建幼畜心肌炎細胞模型中的應用。

本發明所述豚鼠心肌細胞，可以直接使用口蹄疫病毒感染心肌原代細胞模型，進而在細胞水平和分子水平上對口蹄疫病毒對幼畜心肌炎致病機制進行深入研究。具有經濟、省時、表現均一，且重復性好的優點。

優選的，包括如下步驟：

(1)向權利要求1所述細胞系中接種口蹄疫病毒，25cm²/瓶接種口蹄疫病毒液1毫升，吸附10～30分鐘后加心肌細胞培養基CMM，調pH至7.0～7.2，之后加入加青霉素、鏈霉素各100IU/ml，于37℃、5％CO₂濃度培養箱中進行培養；

(2)經步驟(1)培養至細胞病變達到75％以上時，置-20℃反復凍融兩次，待無菌檢驗、支原體檢驗、外源病毒檢驗合格后，幼畜心肌炎細胞模型構建完成。