[發明專利]一種用于分離臨床樣本中的糖基化外泌體的凝集素-磁性載體偶聯復合物

有效

• 申請號: 202010060055.7
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111253491B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 林長青;陳天圣;郝昆;黃鶴;高琦;李艷召;許智慧;郄霜;趙廣珍
• 申請（專利權）人: 北京堯景基因技術有限公司
• 主分類號: C07K17/10
• 分類號: C07K17/10;C07K17/08;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

1.一種糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述糖基化外泌體分離組合物包括：凝集素-磁性載體偶聯復合物、清洗液和洗脫液：

所述凝集素-磁性載體偶聯復合物包括：磁性載體；和偶聯在磁性載體外側的凝集素；其中：

所述凝集素包括：木菠蘿凝集素、花生凝集素、豌豆凝集素、刀豆凝集素、小扁豆凝集素、麥胚素、大豆凝集素、蕓豆凝集素、蝸牛凝集素中的任意一種或者兩種及以上；

所述磁性載體包括：葡聚糖磁珠、瓊脂糖磁珠、樹脂或環氧樹脂磁珠、聚苯乙烯磁珠中的任意一種或者兩種及以上；

所述清洗液為無金屬鹽離子的清洗緩沖液或純化水，用于清洗去除分離過程中非特異性結合的、未發生糖基化的外泌體及其他雜質；

所述洗脫液為溶有糖的硼酸鹽緩沖液，用于洗脫特異性結合在凝集素-磁性載體偶聯復合物上的糖基化外泌體，使洗脫后的外泌體外觀形態完整，無破損或裂解。

2.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述凝集素包括：木菠蘿凝集素、花生凝集素、刀豆凝集素、小扁豆凝集素、麥胚素、大豆凝集素、蕓豆凝集素中的任意一種或者兩種及以上。

3.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述凝集素為小扁豆凝集素。

4.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述磁性載體粒徑分布范圍為1μm-200μm。

5.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述磁性載體粒徑分布范圍為10μm-200μm。

6.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述磁性載體粒徑分布范圍為30μm-150μm。

7.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述凝集素-磁性載體偶聯復合物中，每1ml磁性載體上偶聯有1-20mg凝集素。

8.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述凝集素-磁性載體偶聯復合物中，每1ml磁性載體上偶聯有5-15mg凝集素。

9.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述凝集素-磁性載體偶聯復合物中，每1ml磁性載體上偶聯有10-15mg凝集素。

10.根據權利要求1所述糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述糖基化外泌體包括：N-糖基化外泌體、O-糖基化外泌體、巖藻糖基化外泌體中的任意一種或兩種及以上。

11.根據權利要求1-10任一所述的糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述清洗液為pH值7.6±0.2的無金屬鹽離子的清洗緩沖液。

12.根據權利要求1-10任一所述的糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述洗脫液為硼酸鹽-甘露糖緩沖液。

13.根據權利要求12所述的糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述硼酸鹽-甘露糖緩沖液包括10-20mM的硼酸鹽緩沖液和溶于其中的100-500mM 的甘露糖。

14.根據權利要求1-10任一所述的糖基化外泌體分離組合物，其特征在于，所述洗脫液為pH值6 .5±0 .2的硼酸鹽-甘露糖緩沖液。