[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010059656.6
• 申請(qǐng)日: 2020-01-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111289637B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李先江;張慶合;李紅梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/02
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/86
• 代理公司: 北京思創(chuàng)大成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11614
• 代理人: 高爽

本發(fā)明屬于展青霉素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種檢測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的方法。該方法包括以下步驟：將待測(cè)蘋(píng)果汁與展青霉素同位素內(nèi)標(biāo)混勻，之后進(jìn)行固液分離，得到含內(nèi)標(biāo)的澄清蘋(píng)果汁；利用季胺類(lèi)高分子固相萃取柱對(duì)含內(nèi)標(biāo)的澄清蘋(píng)果汁進(jìn)行前處理，得到待測(cè)樣品；配制含有展青霉素同位素內(nèi)標(biāo)的不同濃度的展青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液；對(duì)待測(cè)樣品以及不同濃度的展青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行UPLC?ID?MS/MS檢測(cè)，得到待測(cè)樣品以及不同濃度的展青霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖峰面積；制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)以及待測(cè)樣品對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜圖峰面積，計(jì)算待測(cè)樣品中展青霉素的含量，從而得到待測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的含量。該方法提高對(duì)蘋(píng)果汁中的展青霉素檢測(cè)的準(zhǔn)確度和靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于展青霉素檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種檢測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的方法。

背景技術(shù)

展青霉素是一種有毒的真菌代謝產(chǎn)物，由于其具有較強(qiáng)的親電性質(zhì)，可以與蛋白質(zhì)等物質(zhì)中親核的巰基和氨基化合物發(fā)生作用，對(duì)人類(lèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)造成不同程度的毒害影響，具有潛在的致畸、致癌、致突變、影響生育和免疫抑制毒性。蘋(píng)果類(lèi)食品尤其是蘋(píng)果汁中展青霉素污染是個(gè)全球性問(wèn)題，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織將展青霉素的最大日均攝入量定為0.4μg/kg體重/天，我國(guó)GB 2761-2017國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定含有蘋(píng)果組分的果汁中展青霉素的上限為50μg/L。

蘋(píng)果汁的組分非常復(fù)雜，除了大量的水外，總固體組分主要包含糖、山梨醇、氨基酸、酚類(lèi)和礦物質(zhì)等。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，葡萄糖、果糖和蔗糖含量最高，約占固體物重量的85％。因此，展青霉素準(zhǔn)確定量的首要問(wèn)題就是降低各種糖對(duì)準(zhǔn)確檢測(cè)的干擾。

在所有對(duì)蘋(píng)果汁的前處理方法當(dāng)中，基于乙酸乙酯的液液萃取、QuEChERS萃取和固相萃取是最廣泛使用的三種。基于乙酸乙酯的液液萃取方法是在蘋(píng)果汁中展青霉素檢測(cè)中常用的前處理方法，這個(gè)方法最大的問(wèn)題就是展青霉素在Na₂CO₃溶液堿性條件中不穩(wěn)定，因此，前處理步驟要越快越好以降低展青霉素?fù)p失。針對(duì)展青霉素的QuEChERS方法需要三步操作和多種化學(xué)試劑，步驟繁瑣耗時(shí)。固相萃取方法因其具有的可選擇的材料種類(lèi)繁多和重復(fù)性好等諸多優(yōu)勢(shì)而日益引起重視。新型的高分子類(lèi)固相萃取材料具有親水浸潤(rùn)性好、吸附容量高、免溶劑活化等諸多優(yōu)點(diǎn)而廣泛應(yīng)用。

蘋(píng)果汁中展青霉素的檢測(cè)方法很多，例如薄層色譜法TLC、毛細(xì)管電泳法CE、氣相色譜質(zhì)譜法GC-MS、高效液相色譜法HPLC-UV和液相色譜質(zhì)譜法HPLC-MS等。薄層色譜法是早期的展青霉素檢測(cè)方法，缺陷是靈敏度低、回收率低、基質(zhì)干擾嚴(yán)重。毛細(xì)管電泳方法本身的重現(xiàn)性差，同時(shí)展青霉素呈電中性不太適合電場(chǎng)分離，所以實(shí)際應(yīng)用很少。氣相色譜質(zhì)譜法中，展青霉素必須進(jìn)行衍生化增加揮發(fā)性，但是蘋(píng)果汁中殘留的酚類(lèi)化合物的活潑質(zhì)子會(huì)干擾反應(yīng)，降低衍生化效率。同時(shí)，衍生化步驟也讓樣品制備過(guò)程復(fù)雜，反應(yīng)不充分也會(huì)導(dǎo)致額外的方法誤差。高效液相色譜法的選擇性差，在反相色譜中保留行為相似的物質(zhì)，如5-羥甲基糠醛會(huì)引起很強(qiáng)的干擾。而液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法，在方法靈敏度和重現(xiàn)性、目標(biāo)離子的選擇性方面更具優(yōu)勢(shì)，是目前展青霉素分析最強(qiáng)大的手段。有機(jī)同位素稀釋質(zhì)譜法采用與待測(cè)物具有相同分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定同位素標(biāo)記的有機(jī)物作為內(nèi)標(biāo)(即稀釋劑)，通過(guò)分別對(duì)同位素豐度的精確質(zhì)譜測(cè)量和加入稀釋劑的準(zhǔn)確稱(chēng)量，可以算出樣品中展青霉素的絕對(duì)量。該方法具有高精度、高準(zhǔn)確度、樣品無(wú)需嚴(yán)格分離等優(yōu)點(diǎn)，是一種公認(rèn)的測(cè)量痕量有機(jī)物的基準(zhǔn)方法，已廣泛應(yīng)用于食品安全領(lǐng)域。

因此，提供一種能快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確測(cè)定蘋(píng)果汁中展青霉素含量的方法，才能滿(mǎn)足生活生產(chǎn)中對(duì)展青霉素檢測(cè)的實(shí)際需求，有效保障食品安全。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的方法，以提高檢測(cè)蘋(píng)果汁中的展青霉素含量的準(zhǔn)確度和靈敏度。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種檢測(cè)蘋(píng)果汁中展青霉素的方法，該方法包括以下步驟：

將待測(cè)蘋(píng)果汁與展青霉素同位素內(nèi)標(biāo)混勻，之后進(jìn)行固液分離，得到含內(nèi)標(biāo)的澄清蘋(píng)果汁；