[發明專利]一種細胞膜包覆的超小四氧化三鐵納米團簇及其制備和應用

有效

• 申請號: 202010059064.4
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111228520B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 沈明武;賈亮;史向陽
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: A61K49/18
• 分類號: A61K49/18;A61K9/50;A61K31/704;A61K47/46;A61K47/02;A61P35/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所(普通合伙) 31233
• 代理人: 魏峯

1.一種細胞膜包覆的超小四氧化三鐵納米團簇的制備方法，包括：

（1）將三氯化鐵溶于溶劑中，加入檸檬酸鈉，攪拌，再加入無水乙酸鈉，繼續攪拌，然后溶劑熱反應，冷卻，離心，干燥，得到超小四氧化三鐵納米顆粒USIONP_S，其中三氯化鐵、溶劑、檸檬酸鈉、無水乙酸鈉的比例為0.62-0.66 g：38-42 mL：0.46-0.51 g：1.3-1.4 g；

（2）將步驟（1）中超小四氧化三鐵納米顆粒超聲分散在超純水中，經EDC和NHS活化，然后加入到乙二胺溶液中反應，透析，濃縮，得到表面氨基化的超小四氧化三鐵納米顆粒USIONP_S-NH₂溶液，其中超小四氧化三鐵納米顆粒、EDC、NHS和乙二胺的比例為50~60mg：145~155 mg：90~100 mg：200~220 μL；

（3）將步驟（2）中USIONP_S-NH₂溶液與預冷的DMSO溶液混合，加入偶聯劑，攪拌反應，透析，冷凍干燥，得到四氧化三鐵納米團簇IONC_S，其中USIONP_S-NH₂溶液、偶聯劑和DMSO溶液的比例為2~4 mL：8~10 mg：10~20 mL；

（4）將鹽酸阿霉素溶于超純水中，加入步驟（3）中四氧化三鐵納米團簇，攪拌，離心，將得到的沉淀重懸于超純水中，冷凍干燥，得到負載阿霉素的四氧化三鐵納米團簇IONC_S/DOX，其中四氧化三鐵納米團簇與鹽酸阿霉素的質量比為0.98:1~1:1；

（5）將B16細胞或小鼠血細胞離心，向得到的B16細胞沉淀或小鼠血細胞沉淀中加入低滲細胞裂解液，反復凍融破碎，采用梯度離心提取B16細胞膜或紅細胞膜，重懸于PBS溶液中，得到B16細胞膜懸液或紅細胞膜懸液，其中，B16細胞或小鼠血細胞與低滲細胞裂解液的比例為10⁷個:2-4 mL；

（6）將步驟（4）中負載阿霉素的四氧化三鐵納米團簇溶于步驟（5）中B16細胞膜懸液或紅細胞膜懸液中，然后擠壓，離心，得到細胞膜包覆的超小四氧化三鐵納米團簇，其中負載阿霉素的四氧化三鐵納米團簇與B16細胞膜懸液或紅細胞膜懸液的比例為200 μg：0.5-1mL。

2.根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（1）中溶劑為二甘醇；繼續攪拌為：空氣氛圍下70-75 ℃攪拌2h；溶劑熱反應溫度為190~220 ℃，溶劑熱反應時間為3~5 h。

3. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（2）中經EDC和NHS活化為：先加入EDC，攪拌反應0.5-1 h，再加入NHS，攪拌反應1-4 h；反應溫度為室溫，反應時間為3-5天。

4. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（3）中DMSO溶液的預冷為：DMSO溶液預冷至10-15 ℃；加入偶聯劑前冰浴1-3min；偶聯劑為對苯二甲醛。

5. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（3）中攪拌反應為：先在40-60 ℃攪拌反應24-48 h，再常溫攪拌反應24-48 h。

6. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（4）中攪拌溫度為室溫，攪拌時間為4-6 h；離心時間為3~8 min。

7. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（5）中反復凍融破碎的工藝參數為：-20 ℃快速冷凍，37 ℃快速融化，重復3-5次；梯度離心為：離心溫度為4 ℃，先以700-850 g的離心力，離心10-20 min，去沉淀，留上清，再以14000-16000 g的離心力，離心30-40min，去上清，留沉淀。

8. 根據權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟（6）中擠壓為：使用Avanti微型擠出機將溶液擠出10~14次；離心轉速為8000-14000 rpm，離心時間為30-40 min。