[發明專利]基于葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺制備葉酸和磁性雙靶向型非病毒基因載體的方法

有效

• 申請號: 202010058923.8
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN111135306B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 石云峰;王軍杰;張憲碩;雷改英;李婷
• 申請（專利權）人: 安陽師范學院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/34;A61K47/22;A61K47/10;A61K41/00;A61P35/00
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 付艷麗

1.一種基于葉酸靶向PEG修飾型超支化聚胺制備的磁性Fe₃O₄納米晶體，其特征在于，該納米晶體具有良好的磁化強度和磁轉染效率，其飽和磁化強度為66 emu/gFe；

所述納米晶體通過以下步驟獲得：

（1）在100mL反應瓶中加入1g葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚乙烯亞胺FA-PEG3.3-HPEI，再加入40mL超純水，攪拌溶解，通氬氣除氧，得到FA-PEG3.3-HPEI水溶液；每個超支化聚乙烯亞胺HPEI分子平均接枝3.3個FA-PEG分子；

（2）取10mL濃度為100g/L的七水硫酸亞鐵無氧水溶液，在氬氣保護下，加入到步驟（1）制備的FA-PEG3.3-HPEI水溶液中，磁力攪拌6h，得到Fe(OH)₂/FA-PEG3.3-HPEI復合物水溶液；

（3）將步驟（2）制備的Fe(OH)₂/FA-PEG3.3-HPEI復合物水溶液于100℃、200W功率下微波加熱1h，得到Fe₃O₄/FA-PEG3.3-HPEI納米復合物水溶液；

（4）將步驟（3）制備的Fe₃O₄/FA-PEG3.3-HPEI納米復合物水溶液于5℃下透析3d，透析袋截留分子量：8000 Da，抽濾除沉淀，冷凍干燥，即得磁性Fe₃O₄納米晶體Fe₃O₄/FA-PEG3.3-HPEI；

所述超支化聚乙烯亞胺的M_w=25000，支化度=50%，PDI = 2.5。

2.一種基于葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺制備葉酸和磁性雙靶向型非病毒基因載體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺溶解于水中，并通氬氣除氧，得到葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺水溶液；

（2）氬氣保護下，向步驟（1）得到的水溶液中加入七水硫酸亞鐵的無氧水溶液，磁力攪拌1-6h，得到Fe(OH)₂/葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺復合物水溶液；

（3）將步驟（2）所得的產物于90-130℃下微波加熱0.5-2h，即可得到Fe₃O₄/葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺復合物；

（4）將步驟（3）所得的產物在2-8℃條件下透析3-5d，抽濾除去沉淀，冷凍干燥，即可得到所述葉酸和磁性雙靶向型非病毒基因載體；

步驟（1）中所述葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺為葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚乙烯亞胺；

步驟（1）中葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺水溶液的濃度為2.5-200g/L，體積為10-100mL；

步驟（2）中所述七水硫酸亞鐵水溶液的濃度為2-1500g/L，體積為2-20mL；

超支化聚乙烯亞胺的M_w=25000，支化度=50%，PDI = 2.5；

步驟（1）中每個超支化聚乙烯亞胺分子平均接枝3.3個FA-PEG分子；

步驟（3）中的微波功率為100-600W。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中葉酸靶向聚乙二醇修飾型超支化聚胺是以葉酸、聚乙二醇和超支化聚胺作為原料制備得到的，其中超支化聚胺為超支化聚乙烯亞胺。

4.采用權利要求2或3所述方法制備的葉酸和磁性雙靶向型非病毒基因載體。