[發明專利]一種脂肪源干細胞的分離制備方法及脂肪源干細胞

有效

• 申請號: 202010058329.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN113136363B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 王莉;潘程嬌;王逸飛;梅增健;王春慧;李寧;袁惟芯
• 申請（專利權）人: 上海賽傲生物技術有限公司;北京賽傲生物技術有限公司;重慶賽傲生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 沈其梅

本發明提供了一種脂肪源干細胞的分離制備方法，1，無菌條件下采集脂肪組織保存；2，將脂肪組織離心分離，留下脂肪組織層；3，用生理鹽水清洗脂肪組織，離心分層，留下脂肪組織，重復本步驟；4，在3獲得的脂肪組織中加入膠原酶溶液消化，離心后留下細胞沉淀和脂肪組織層；5，在4獲得的脂肪組織中加入膠原酶溶液消化，離心后留下細胞沉淀，將細胞沉淀重懸在含人血白蛋白的生理鹽水中，與4中的細胞沉淀懸浮液合并；6，將5獲得的細胞沉淀過濾后離心，棄上清，得到脂肪源干細胞。通過本發明制備得到的脂肪源干細胞數量大、活率高、純度高，完全能滿足臨床要求。

技術領域

本發明涉及一種細胞的分離方法，尤其涉及一種脂肪源干細胞的分離制備方法。

背景技術

脂肪源干細胞(adipose derived stem cells,ADSC)具有自我更新與多種分化潛能,通過分離培養可以在體外穩定增殖,在特定的誘導條件下,可以被分化誘導為脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞、神經細胞等。新鮮分離的ADSC在組織工程、再生醫學及修復中有著廣泛的應用，如應用于股骨頭壞死組織工程技術修復、輔助脂肪移植、面部年輕化、促進毛發生長、皮膚燒傷、糖尿病足、骨缺損修復、神經損傷修復以及炎癥性疾病等的治療。

新鮮分離的ADSC是來源于脂肪組織的脂肪血管基質細胞(脂肪血管基質組分，Stromal vascular fraction，SVF)的主要組成部分之一(Adipose tissue-derivedstromal vascular fraction in regenerative medicine:a brief review on biologyand translation.Stem Cell Res Ther.201715；8(1):145.)。2018年復旦大學湯其群教授將從脂肪組織中分離的SVF作為ADSC的一種，。ClinicalTrials.gov網站上登記的很多臨床研究中，有研究者直接使用新鮮分離的ADSC進行臨床研究。

CD34作為間充質干細胞的主要陰性標記，研究發現在新鮮分離的ADSC中可以檢測到CD34，而且會隨著不斷的傳代而逐漸消失，因此目前研究學者將CD34視為前脂肪細胞和祖細胞的標志物，以CD34的檢測結果來判斷新鮮分離的ADSC純度。

從脂肪中分離ADSC的方法尚未達成共識，而且純度不高，目前ADSC的制備方法主要有兩種：一是使用蛋白酶水解消化脂肪組織的酶消化法；二是不使用蛋白水解酶的物理機械法，如常鵬于2014年8月12申請的授權號為CN203999585U的專利“一種富集脂肪源干細胞自動提取裝置”公開了一種自動提取裝置分離富集脂肪源干細胞的方法，使用物理機械法分離脂肪源干細胞耗時很長，有些方法需要三天左右，同時細胞得率、活性以及純度較低，很難滿足臨床需求。。

酶消化法常采用Ⅰ型膠原酶或混合膠原酶與脂肪組織按一定比例混合，消化1～3小時，隨后離心過濾得到脂肪源干細胞，細胞得率、活性和物理機械法相比雖然有一定程度的提高，但是仍有較大的改進和提升空間。