[發明專利]一種脂肪源干細胞的分離制備方法及脂肪源干細胞

有效

• 申請號: 202010058329.9
• 申請日: 2020-01-19
• 公開（公告）號: CN113136363B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 王莉;潘程嬌;王逸飛;梅增健;王春慧;李寧;袁惟芯
• 申請（專利權）人: 上海賽傲生物技術有限公司;北京賽傲生物技術有限公司;重慶賽傲生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 沈其梅

1.一種脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述方法包括：

步驟1，無菌條件下采集脂肪組織，保存在脂肪組織保護液中；

步驟2，將脂肪組織離心分離成四層，分別為油脂層、脂肪組織層、液體層和底部沉淀，棄油脂層、液體層和底部沉淀，留下脂肪組織層；

步驟3，用生理鹽水清洗脂肪組織，離心分層，留下脂肪組織，重復本步驟至無油脂層和底部沉淀；

步驟4，在步驟3獲得的脂肪組織中加入膠原酶溶液，恒溫振蕩消化至無大塊組織塊，離心后留下細胞沉淀和脂肪組織層，將細胞沉淀重懸在含人血白蛋白的生理鹽水中，得到的細胞懸液備用；

步驟5，在步驟4獲得的脂肪組織中加入膠原酶溶液，恒溫振蕩消化至脂肪組織呈乳狀，離心后留下細胞沉淀，將細胞沉淀重懸在含人血白蛋白的生理鹽水中，與步驟4中的細胞懸液合并；

步驟6，將步驟5獲得的細胞沉淀過濾后離心，棄上清，得到脂肪源干細胞。

2.如權利要求1所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述方法還包括：

步驟7，用適量含人血白蛋白的生理鹽水重懸步驟6獲得的脂肪源干細胞，離心，過濾棄上清，再重復本步驟一次，得到脂肪源干細胞。

3.如權利要求1所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述脂肪組織保護液由人血白蛋白注射液、丙酮酸鈉、生理鹽水、青霉素、鏈霉素組成。

4.如權利要求3所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述脂肪組織保護液各組分為：人血白蛋白注射液和生理鹽水的體積比為5-10:90-95，丙酮酸鈉濃度為1-3mg/mL，青霉素和鏈霉素的濃度為100Units/mL。

5.如權利要求1、2或3任一權利要求所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述步驟6中采用70μm的濾網過濾。

6.如權利要求1所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述含人血白蛋白的生理鹽水，所述人血白蛋白最終質量濃度為2％～4％。

7.如權利要求1-4或6任一權利要求所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述步驟4和步驟5中脂肪組織與膠原酶溶液的體積比為1:0.25-1:1。

8.如權利要求7所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述膠原酶溶液采用注射用膠原酶和生理鹽水配置而成。

9.如權利要求7所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述膠原酶溶液使用前預熱至37℃；所述膠原酶溶液中膠原酶酶活性為62.5～250.0U/mL。

10.如權利要求9所述脂肪源干細胞的分離制備方法，其特征在于，所述步驟4和步驟5中脂肪組織與膠原酶溶液的體積比為1:0.5。

11.如權利要求1-4、6、7或9任一權利要求所述的分離制備方法分離制備的脂肪源干細胞。