[發(fā)明專利]一種一鍋法制備用于檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010057735.3 | 申請日： | 2020-01-19 |
| 公開（公告）號： | CN111171091B | 公開（公告）日： | 2021-02-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 鮑彥;吳義進(jìn);劉真真;王忠 | 申請（專利權(quán)）人： | 合肥華納生物醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C07H15/26 | 分類號： | C07H15/26;C07H1/00;C12Q1/34 |
| 代理公司： | 北京集智東方知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11578 | 代理人： | 吳倩 |
| 地址： | 231600 安徽省合肥市肥*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 一鍋 法制 備用 檢測 葡萄 糖醛酸 方法 | ||
本發(fā)明公開了一種一鍋法制備用于檢測β?D?葡萄糖醛酸苷酶的底物的方法，具體為以式（I）結(jié)構(gòu)化合物和乙酰溴?α?D?葡萄糖醛酸甲酯為原料，在極性溶劑、偶聯(lián)試劑存在的條件下反應(yīng)8?24h后加入堿性試劑，室溫反應(yīng)4?8h后加入酸性試劑調(diào)節(jié)pH至2?3，經(jīng)后處理制所述用于檢測β?D?葡萄糖醛酸苷酶的底物。本發(fā)明以苯酚結(jié)構(gòu)上取代或未取代的酚酞以及乙酰溴?α?D?葡萄糖醛酸甲酯為反應(yīng)物，制備了用于檢測β?D?葡萄糖醛酸苷酶的底物，反應(yīng)步驟和操作非常簡便，降低了工藝復(fù)雜性，易于擴(kuò)大化生產(chǎn)。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及藥物合成，具體涉及一種一鍋法制備用于檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物的方法。
背景技術(shù)
β葡萄糖醛酸苷酶是細(xì)胞溶酶體中的水解酶，廣泛分布于自然界多種生物體系中，負(fù)責(zé)催化葡萄糖醛酸結(jié)合物的水解反應(yīng)，在肝細(xì)胞中含量較高。人體內(nèi)β-葡萄糖醛酸苷酶的表達(dá)與一些炎癥及癌癥的發(fā)生發(fā)展過程密切相關(guān)，因此也被認(rèn)為是一種重要的腫瘤標(biāo)志物。測定β葡萄糖醛酸苷酶，有助于病情觀察和預(yù)后評價(jià)，它的生物技術(shù)潛力正越來越受到人們的關(guān)注。但由于其制備方法較為繁雜、現(xiàn)有的制備方法多存在收率低、需更換溶劑等問題，因此尚未實(shí)現(xiàn)大規(guī)模制備。申請?zhí)枮镃N201810068438.1的專利申請中公開了檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物及其制備方法和試劑盒，并具體公開了將百里酚酞與乙酰溴-α-D-葡萄糖酮酸甲基酯反應(yīng)制得百里酚酞-α-乙酰基-D-葡糖醛酸甲酯，脫除乙酰基得到百里酚酞-α-D-葡糖醛酸甲酯，然后經(jīng)水解反應(yīng)得到百里酚酞-α-D-葡糖醛酸的方法。但上述方法在百里酚酞與乙酰溴-α-D-葡萄糖酮酸甲基酯反應(yīng)的步驟使用二氯甲烷作為溶劑、在脫乙酰基的步驟中使用甲醇作為溶劑以及反應(yīng)過程中需要加熱，也即存在需要更換溶劑而導(dǎo)致引入雜質(zhì)、產(chǎn)生污染的問題，此外，上述方法為多步法反應(yīng)且兩步合并收率較低，并且導(dǎo)致生產(chǎn)工藝復(fù)雜，一方面在生產(chǎn)共過程產(chǎn)生大量廢棄物，另一方面復(fù)雜的生產(chǎn)工藝對于工業(yè)化大規(guī)模制備目標(biāo)物在成本和安全等方面帶來非常不利的影響。
發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明提供一種一鍋法制備用于檢測β-D-葡萄糖醛酸苷酶的底物的方法，具體為：以式（I）結(jié)構(gòu)化合物和乙酰溴-α-D-葡萄糖醛酸甲酯為原料，在極性溶劑、偶聯(lián)試劑存在的條件下反應(yīng)一定時間后加入堿性試劑，室溫反應(yīng)一定時間后加入酸性試劑調(diào)節(jié)pH至酸性，經(jīng)后處理制得式（II）結(jié)構(gòu)化合物、即用于檢測β-葡萄糖醛酸苷酶的底物。
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式（I）、（II）中R1、R2分別獨(dú)立地選自H、鹵素、CN、C1-C6烷基、鹵代C1-C6烷基、C2-C6烯基、鹵代C2-C6烯基、C1-C6烷氧基、鹵代C1-C6烷氧基、C3-C6環(huán)烷基；
進(jìn)一步地，具體步驟如下：
S1：將式（I）結(jié)構(gòu)化合物和乙酰溴-α-D-葡萄糖醛酸甲酯加入反應(yīng)瓶內(nèi)，加入極性溶劑、偶聯(lián)試劑，反應(yīng)8-24h；
S2：攪拌條件下加入堿性試劑，控制反應(yīng)溫度為室溫，反應(yīng)4-8h后加入酸性試劑，調(diào)pH至2-3，后旋蒸掉極性溶劑并經(jīng)反相純化得到式（II）結(jié)構(gòu)化合物即產(chǎn)物β-葡萄糖醛酸。
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